[发明专利]测定肝微粒体中NNK代谢物的液质联用方法

摘要

测定肝微粒体中NNK代谢物的液质联用方法，属于生物化学分析领域，具体为一种分析测定肝微粒体中4-(甲基亚硝基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)代谢物的液质联用方法。本发明方法主要包括以下步骤：（1）肝微粒体孵育体系的配制；（2）样品处理：（3）样品分析，通过液质联用方法进行肝微粒体中NNK代谢物测定。本发明的优点在于：前处理简单、分析速度快、选择性好、检测灵敏度高，且可分析比较NNK在不同种属肝微粒体中的代谢。可以为进一步研究NNK及其他亚硝胺化合物的体内外代谢奠定方法学基础，具有重要意义。

主权项

测定肝微粒体中NNK代谢物的液质联用方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）肝微粒体孵育体系的配制孵育：取离心管，依次加入孵育液B，孵育液A，所需浓度的NNK，补加磷酸盐缓冲溶液配成肝微粒体孵育体系；反应：将离心管置于37.0 ℃水浴中5 min，加入肝微粒体，轻摇孵育体系使之均匀后不再晃动，置于37.0 ℃水浴中静止反应30 min；（2）样品处理：取出反应产物，加入预冷的内标乙腈溶液终止反应，放于4℃冰箱中保存60 min使蛋白沉淀，3500 rpm离心10 min，取上清再于10000 rpm离心5 min，上清液过0.22 μm滤膜后进样2 μL分析；（3）样品分析,进行肝微粒体中NNK代谢物测定，具体条件如下：色谱条件：色谱柱： HILIC Silica柱；流动相：A：水（含10 mM甲酸铵），B：乙腈；流速：500 μL/min；洗脱方式：梯度洗脱；进样量：2 μL；柱温：26 ℃；质谱条件：电离模式：电喷雾电离（ESI）；扫描模式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；电喷雾电压（IS）：5500 V；离子源温度（TEM）：600 ℃；雾化气（GS1, N2）：65 psi；辅助加热气（GS2 , N2）：60 psi；气帘气（Curtain gas, CUR, N2）：35 psi；碰撞气（Collision gas, CAD, N2）：8 psi；驻留时间（Dwell Time）：50 ms；入口电压EP（Entrance Potential）：10 V；出口电压CXP（Collision Cell Exit Potential）：12 V。