[发明专利]用饱和染料进行核酸解链分析

摘要

用饱和染料进行核酸解链分析。本发明提供了核酸分析方法，其中将靶核酸与dsDNA结合染料混合形成混合物。任选地，该混合物中包含未标记探针。通过在加热该混合物时测定dsDNA结合染料的荧光，产生靶核酸的解链曲线。也提供了用于核酸分析的染料和染料的制备方法。

主权项

1.一种PCR反应混合物，含有：(a)靶核酸；(b)PCR试剂；(c)设计用于扩增所述靶核酸以产生扩增子的一对寡核苷酸引物；(d)设计用于与所述扩增子的至少一部分杂交的3’端封端的未标记探针；(e)具有下式的dsDNA结合染料：式中，部分代表任选取代的稠合的单环或多环芳环或任选取代的稠合的单环或多环含氮杂芳环；X是氧、硫、硒、碲或选自下组的部分：C(CH₃)₂或NR¹，其中R¹是氢或C_1-6烷基；R²选自：C_1-6烷基、C_3-8环烷基、芳基、芳基(C_1-3烷基)、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、单烷基氨基烷基和二烷基氨基烷基、三烷基铵烷基、亚烷基羧酸酯、亚烷基羧酰胺、亚烷基磺酸酯、任选取代的含杂原子的环状部分或任选取代的含杂原子的非环状部分；t＝0或1；Z是0或1个电荷；R³、R⁹和R¹⁰各自独立地选自：氢、C_1-6烷基或芳基羰基；n＝0、1或2；和Q是选自下组结构的杂环：式中R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地选自：氢、卤素、烷基、环烷基、杂烷基、杂环烷基、烯基、聚烯基、炔基、聚炔基、烯基炔基、芳基、杂芳基、烷氧基、烷硫基、芳基硫基、芳基羰硫基、二烷基氨基、环杂烷基羰硫基、二烷基氨基烷基羰硫基、三烷基铵烷基羰硫基、环烷硫基、环杂烷硫基、三烷基铵烷硫基、或核苷硫基，以上基团各自可被任选取代；以及各自任选地包含季铵部分的含杂原子的非环状部分、含杂原子的环状部分、BRIDGE-DYE或反应性基团，R⁴选自芳基羰硫基、环杂烷基羰硫基、二烷基氨基烷基羰硫基、三烷基铵烷基羰硫基、环烷硫基、环杂烷硫基、三烷基铵烷硫基、烷基腈硫基或核苷硫基，以上基团各自可被任选取代。