[发明专利]一种重组质粒及应用其制备的重组溶瘤腺病毒

摘要

本发明公开了一种重组质粒及应用其制备的重组溶瘤腺病毒。本发明中，将DNA片段甲(自上游至下游包括两个元件：U6启动子元件、1504-siRNA编码元件)和DNA片段乙(TERTp启动子元件、E1A基因元件、E1B55K-E1B19K基因元件)插入溶瘤腺病毒载体，得到了重组溶瘤腺病毒载体。将该重组溶瘤腺病毒载体转染细胞并进行培养，可以得到含有重组溶瘤腺病毒的培养上清。该重组溶瘤腺病毒中，由肿瘤特异启动子启动(TERTp启动子)腺病毒早期复制基因E1A的表达，即在正常细胞中不表达或表达量极低，当在肿瘤细胞中表达时同时表达1504-siRNA。该重组腺病毒具有很好的肿瘤细胞特异性，能够发挥溶瘤和抑瘤的双重作用，具有很高的医疗价值。

主权项

一种DNA片段，包括DNA片段甲和DNA片段乙；所述DNA片段甲包括U6启动子和1504‑siRNA编码DNA；所述DNA片段乙包括TERTp启动子、E1A基因和E1B55K‑E1B19K基因；所述U6启动子如序列表的序列1自5’末端第192至211位核苷酸所示；所述1504‑siRNA编码DNA如序列表的序列1自5’末端第271至291位核苷酸所示；所述TERTp启动子如序列表的序列2自5’末端第9至第461位核苷酸所示；所述E1A基因如序列表的序列2自5’末端第469至1454位核苷酸所示；所述E1B55K‑E1B19K基因如序列表的序列2自5’末端第1623至第3418位核苷酸所示。