[发明专利]一种高通量测定转植酸酶作物种子中植酸酶活性的方法有效
| 申请号： | 201110326940.6 | 申请日： | 2011-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN102352406A | 公开（公告）日： | 2012-02-15 |
| 发明（设计）人： | 初晓宇;杨文竹;伍宁丰;陈茹梅;范云六;姚斌 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/44 | 分类号： | C12Q1/44 |
| 代理公司： | 北京市德权律师事务所 11302 | 代理人： | 余光军 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高通量测定转植酸酶作物种子中植酸酶活性的方法，该方法包括：（1）以磷含量为横坐标，吸光值为纵坐标，建立磷标准曲线；（2）将待检测样品中的植酸酶浸提出来，得到植酸酶的浸提液；（3）将植酸酶的浸提液在96孔微孔板中进行植酸酶的酶活性测定反应；（4）测定反应溶液的吸光值，对应磷标准曲线建立的直线回归方程计算出各个待测样品中的磷浓度，再依据酶活计算公式计算出待检测样品的植酸酶活性。准确度和灵敏度试验结果表明，本发明方法测定结果准确性好、误差小、稳定性高、重复性好，变异系数也远低于现有的微板法。本发明检测方法具有高通量、检测效率高、操作简便、成本低、准确性高等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 通量 测定 转植酸酶 作物 种子 中植酸酶 活性 方法 | ||
【主权项】：
1.一种高通量测定转植酸酶作物种子或添加有转植酸酶作物种子的饲料中植酸酶酶活的方法，其特征在于，包括以下步骤： （1）以磷含量为横坐标，OD415吸光值为纵坐标，建立磷标准曲线； （2）将待检测的转植酸酶作物种子或添加有转植酸酶作物种子的饲料样品中的植酸酶浸提出来，得到植酸酶浸提液； （3） 将植酸酶浸提液在96孔微孔板中进行植酸酶的酶活性测定反应； （4）酶活性测定反应结束后测定反应溶液的吸光值，对应标准曲线建立的直线回归方程，计算出各个待测样品中的磷浓度，再依据下列公式计算出待检测样品中的植酸酶活性： YU/g=![]()
；Y-样品溶液实测吸光值在标准曲线中对应磷的浓度，单位：mmol/L；N-样品溶液的稀释倍数；m-样品质量；单位：g；30-反应时间，单位：min。
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