[发明专利]一种表达苯丙氨酸解氨酶的乳酸乳球菌制品的制备方法有效
| 申请号： | 201110339617.2 | 申请日： | 2011-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN102358890A | 公开（公告）日： | 2012-02-22 |
| 发明（设计）人： | 周敏毅;牛春;刘金毅;程永庆 | 申请（专利权）人： | 北京三元基因工程有限公司;北京毕艾欧科技发展有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 102600 北京市大兴区北臧村镇北京生物*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明属于生物医药领域，涉及表达苯丙氨酸解氨酶的乳酸乳球菌制品的制备方法，按顺序包括如下步骤：1）获得表达苯丙氨酸解氨酶的基因；2）将表达苯丙氨酸解氨酶的基因与适于转化乳酸乳球菌的表达载体相连接形成重组表达载体；3）将重组表达载体转化感受态的乳酸乳球菌；4）筛选获得高效表达苯丙氨酸解氨酶的乳酸乳球菌菌株；5）发酵乳酸乳球菌并诱导表达苯丙氨酸解氨酶；6）干燥发酵收获的菌体，其中在步骤5）的发酵时使用的培养基由体积比4∶6-6∶4的配制中间培养基与M17肉汤培养基混合得到，并将pH值调节到6.5-7.5。采用本发明的技术方案可使获得的乳酸乳球菌活菌数和其中苯丙氨酸解氨酶的比活力大幅提高，其中前者可达到1012CFU/ml以上，后者可达到80U/g以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 苯丙氨酸 解氨酶 乳酸 球菌 制品 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种表达苯丙氨酸解氨酶的乳酸乳球菌制品的制备方法，按顺序包括如下步骤：1）获得表达苯丙氨酸解氨酶的基因；2）构建重组表达载体：将表达苯丙氨酸解氨酶的基因与适于转化乳酸乳球菌的表达载体相连接形成重组表达载体；3）构建工程菌：将重组表达载体转化感受态的乳酸乳球菌；4）筛选获得高效表达苯丙氨酸解氨酶的乳酸乳球菌菌株；5）发酵乳酸乳球菌并诱导表达苯丙氨酸解氨酶；6）干燥发酵收获的菌体，其特征是在5）的发酵时使用的培养基由体积比4:6 6:4的配制中间培养基与M17肉汤培养基混合得到，并将pH值调节到6.5 7.5，所述的配制中间培养基每1L中含有蛋白胨5 30g，酵母提取物2.5 15g，乳糖或葡萄糖5 30 g，MgSO4.7H2O 0.2 0.5g，MnSO4.H2O 0.05 0.1g，NaAc.3H2O 3.3g，KH2PO4 2g，Tween 80 0.5 5ml。
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