[发明专利]用于诊断和治疗过敏性疾病的蛋白及其制备方法

摘要

用于诊断和治疗过敏性疾病的蛋白及其制备方法，它涉及生物技术领域。它的制备方法为：取猫毛后剪碎，在约50克猫毛，加入2倍体积的丙酮，清洗脱脂2-5小时；反复脱脂共3次。脱脂后的猫毛浸于含0.4％笨酚的碳酸氢钠盐水液中，4℃磁力搅拌10小时；离心，除去沉淀，将上清调节pH到5.0，加入(NH4)2SO4至80％饱和度，4℃搅拌30-60分钟，离心，收集沉淀；将沉淀用少量碳酸氢钠盐水液重新溶解，除去(NH4)2SO4，得到猫毛盐溶蛋白的粗提物；将粗提物先用阴离子交换柱分离纯化，再用凝胶柱分离纯化；收集活性峰，蒸馏水透析后，得到分子量为40kD的猫毛过敏原，加50％甘油保存；本发明可用于过敏性哮喘、鼻炎、慢性荨麻疹等症的治疗。

主权项

用于诊断和治疗过敏性疾病的蛋白及其制备方法，其特征在于它的制备方法为：1)取宠物猫毛前三天内不用洗发液洗宠物，部位不限，取猫毛后剪碎备用。2)在约50克猫毛，加入2倍体积的丙酮，清洗脱脂2‑5小时；倾倒出丙酮，加入新的丙酮，重复清洗脱脂2次。3)三次脱脂后，倾倒出上层丙酮，保留下层固体，于室温自然吹干，待残留猫毛末中毫无丙酮刺激气味即为丙酮挥干标准。4)取晾干后的猫毛按照1∶25W/V浸于含0.4％笨酚的碳酸氢钠盐水液中(5gNaCl/L；2.75g NaHCO3/L；pH＝8.2，Coca’s Solution)，即每25毫升碳酸氢钠盐水液中有1克脱脂后的猫毛，4℃磁力搅拌10小时；间隔冷浸过夜，再磁力搅拌，至少72小时后取上层清夜；离心，除去沉淀，将上清调节pH到5.0，加入(NH4)2SO4至80％饱和度，4℃搅拌30‑60分钟，离心，收集沉淀；将沉淀用少量碳酸氢钠盐水液重新溶解，并用同样缓冲液对样品进行透析，除去(NH4)2SO4，得到猫毛盐溶蛋白的粗提物；将粗提物先用阴离子交换柱分离纯化，再用凝胶柱分离纯化；收集活性峰，蒸馏水透析后，得到分子量为40kD的猫毛过敏原，加50％甘油保存。