[发明专利]产酸克雷伯氏菌的时间分辨荧光免疫检测法

摘要

产酸克雷伯氏菌的时间分辨荧光免疫检测法，涉及一种病原菌的检测。提供一种灵敏度高、特异性强、简便快速的产酸克雷伯氏菌的时间分辨荧光免疫检测法。产酸克雷伯氏菌菌株的微生物学鉴定；制备免抗产酸克雷伯氏菌抗体；IgG的Eu3+标记及纯化；建立产酸克雷伯氏菌TRFIA检测方法。灵敏度为1.0×105cfu/孔，高于荧光抗体法。应用荧光抗体法进行病原菌全菌体检测，需要显微镜目测观察荧光强度大小，主观性大，由于背景荧光的干扰，检测灵敏度低，且无法给出具体的灵敏度数值。通过TRFIA测定不同浓度的产酸克雷伯氏菌CPS值表明，该法的范围宽，能定量检测。

主权项

产酸克雷伯氏菌的时间分辨荧光免疫检测法，其特征在于所述产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca已于2011年07月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.5060；所述检测法包括以下步骤：1)产酸克雷伯氏菌菌株的微生物学鉴定；2)制备免抗产酸克雷伯氏菌抗体；3)IgG的Eu3+标记及纯化；4)建立产酸克雷伯氏菌TRFIA检测方法将产酸克雷伯氏菌菌株首先用无菌生理盐水洗涤，4500r/min，离心5min，弃上清；Na2CO3‑NaHCO3缓冲溶液稀释，取100μL加入到96孔微孔板中包被，用洗涤液冲洗，每孔加入200μL 1％的BSA，37℃封闭2h，洗涤，加入1∶320稀释的Eu3+‑IgG溶液100μL，37℃振动孵育1h，用洗涤液冲洗，每孔加入200μL增强液，振荡，多标记分析仪上测量荧光读数CPS；设碳酸盐包被液作阴性对照，以样品孔的CPS值与对照孔的CPS值之比大于2时判断为阳性。