[发明专利]一种多孔整体柱固定化酶微反应器的制备方法

摘要

本发明公开了一种多孔整体柱固定化酶微反应器的制备方法，按照以下方法制备得到：首先制备聚(甲基丙烯酸缩水甘油酯-乙二醇二甲基丙烯酸酯)(poly(GMA-co-EDMA))整体柱，然后分别用半胱胺和金纳米粒子修饰poly(GMA-co-EDMA)整体柱，得到表面固载金纳米粒子的多孔聚合物整体柱。利用Au-NH2键作用，将酶固定于该金纳米粒子修饰的多孔整体柱孔表面，即得多孔整体柱固定化酶微反应器。本发明具有以下优点：制备方法简单，酶固定反应条件温和，酶微反应器的通透性好，固定的酶量多，与自由溶液酶解相比，酶的活性、使用寿命和稳定性高，且可反复使用。

主权项

1.一种多孔整体柱固定化酶微反应器的制备方法，其特征在于：制备方法包括如下步骤：(1)金纳米粒子的合成：在搅拌条件下，先将去离子水加热回流至沸腾，接着加入氯金酸并继续加热至溶液剧烈沸腾，然后迅速加入柠檬酸钠并保持溶液沸腾一定时间，这期间溶液颜色由灰色变为酒红色，移去热源后自然冷却至室温，即获得金纳米粒子胶体溶液，于4℃下保存备用；(2)多孔整体柱的制备：以甲基丙烯酸缩水甘油酯为功能单体(GMA)、乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂(EDMA)、偶氮二异丁腈(AIBN)为热引发剂、1,4-丁二醇和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为致孔剂，在经乙烯基功能化的石英毛细管内原位聚合，制得聚(甲基丙烯酸缩水甘油酯-乙二醇二甲基丙烯酸酯)(poly(GMA-co-EDMA))整体柱；室温下，用助推器将0.5~2.5mol/L的半胱胺水溶液通入poly(GMA-co-EDMA)整体柱中，反应10~60min，再用去离子水冲洗柱子，直至流出的液体为中性，即可得硫醇基衍生化的毛细管整体柱poly(GMA-co-EDMA-SH)；接着，室温下向poly(GMA-co-EDMA-SH)柱通入金纳米粒子胶体溶液直至红色溶液流出，用蒸馏水冲去未反应的金纳米粒子胶体溶液，得到金纳米粒子修饰毛细管整体柱poly(GMA-co-EDMA-AuNPs)；(3)酶的固定：将0.05~0.2mgmL¹的酶溶液吸入注射器中，室温下以0.1~0.5mL/h的流速通过入poly(GMA-co-EDMA-AuNPs)整体柱，反应时间为1~5h；用0.3~0.6mL的磷酸盐缓冲溶液(5~20mmol/L,pH6.5~7.5)冲洗该整体柱，以除去未反应的酶，即得到多孔整体柱固定化酶微反应器。