[发明专利]一种红外光谱测定低浓度蛋白质二级结构的方法

摘要

本发明属于红外光谱分析技术领域，具体为一种红外光谱测定低浓度蛋白质二级结构的方法。本发明利用氢氧化铝胶体对蛋白质的吸附性，浓缩低浓度蛋白质，形成氢氧化铝-蛋白质复合物，用于红外光谱检测。该发明使得红外光谱在测定蛋白质二级结构时，对蛋白质浓度的要求降低至0.5mg/ml，和传统红外光谱测定蛋白质二级结构方法相比对蛋白质浓度的要求至少下降了24倍。本发明方法操作简单、测试效率高。

主权项

一种红外光谱测定低浓度蛋白质二级结构的方法，其特征在于具体如下：（1）制备氢氧化铝‑蛋白质复合物，具体步骤为：a. 将质量浓度为2%氢氧化铝胶体和蛋白质对应的缓冲液按体积比为1:4‑1:6混合，以低转速4000‑5000rpm离心2‑3分钟； b. 去除上清液，用缓冲液将步骤a中得到的氢氧化铝沉淀重悬至原浓度；c. 将浓度为0.5mg/ml‑1.5mg/ml的蛋白质和步骤b中所得的氢氧化铝胶体按体积1:8‑1:12混合，摇匀后放置室温孵化30‑40分钟；d. 将步骤c中所得的混合物以转速4000‑‑5000rpm离心2‑3分钟，去除上清液；（2）收集谱图：将由缓冲液洗过的氢氧化铝胶体均匀的铺满蛋白质分析红外光谱仪的6.5um固定光程的CaF2样品池，使用Prota数据处理软件收集背景光谱；在相同条件下，将氢氧化铝‑蛋白质复合物均匀的铺满CaF2样品池，调节固定样品池，使得和背景的光程一样，收集样品的红外光谱图；（3）谱图处理：使用Prota数据处理软件，将氢氧化铝‑蛋白质复合物的红外图谱扣除氢氧化铝胶体的背景图谱；位于2000 cm‑1‑1750 cm‑1间呈一条光滑直线作为背景扣除与否的标志,使用Prota软件中Savitsky‑Golay求导功能对蛋白质吸收光谱进行二次求导，获得二级导数谱，并作基线修正。