[发明专利]一种人工杂交六倍体油菜小孢子再生植株的培养方法

摘要

本发明公开了一种人工杂交六倍体油菜小孢子再生植株的培养方法，包括：取人工杂交六倍体油菜的花序作为小孢子培养的供体；将灭菌后的六倍体油菜花蕾加入到1/2B5-13培养基中研磨成悬浮液，过滤、离心得到沉淀；先后加入NLN-13液体培养基、秋水仙碱和活性炭的混合液，得到小孢子混合悬浮液；黑暗条件下热激处理后培养，得到子叶期胚状体；接种到再生培养基中培养直接形成再生芽；切取再生芽接种至生根培养基中进行生根培养，移栽得到再生植株，鉴定倍性。本发明首次公开了人工杂交六倍体油菜小孢子培养的方法，首次培育出六倍体油菜小孢子来源的双单倍体群体，为后续建立ABC基因组的连锁遗传图提供便利。

主权项

一种人工杂交六倍体油菜小孢子再生植株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取人工杂交六倍体油菜的花序作为小孢子培养的供体；(2)将灭菌后的六倍体油菜花蕾加入到1/2B5 13培养基中研磨成悬浮液，过滤所得滤液经离心、弃上清液得到沉淀；在所述沉淀中加入NLN 13液体培养基，将小孢子细胞浓度调至3×105～5×105个细胞/mL后，再依次加入秋水仙碱溶液和活性炭混合液，得到六倍体油菜小孢子培养的混合悬浮液；(3)将所述六倍体油菜小孢子培养的混合悬浮液在黑暗条件下于30℃～33℃恒温热激处理1～3天后，在黑暗条件下于20℃～28℃培养10天～15天，直至肉眼可见时，在黑暗条件下于20℃～28℃再震荡培养5天～10天，得到子叶期胚状体；(4)将所述子叶期胚状体接种到含有细胞分裂素的再生培养基中，在每天12小时～18小时光照和20℃～28℃下培养，形成再生芽；(5)切取再生芽接种至不含激素的生根培养基中，在每天12小时～18小时光照和20℃～28℃条件下进行生根培养，将根生长健壮的苗炼苗后移栽到土壤里，得到再生植株，鉴定倍性。