[发明专利]一种嗜热菌蛋白酶的固定化方法有效
| 申请号： | 201110363336.0 | 申请日： | 2011-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN102433317A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 谢恬;陈飞飞;王安明;张方凯;杜方川 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学 |
| 主分类号： | C12N11/08 | 分类号： | C12N11/08 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 地址： | 310036 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种嗜热菌蛋白酶的固定化方法，(1)载体活化：将氨基化的介孔泡沫硅载体MCFs-NH2浸渍在0.5～2.5mM的对苯醌溶液中，振荡活化1～3小时，离心，取沉淀洗涤，洗涤后的沉淀重新分散于MES-NaOH溶液中，得到活化的载体液；(2)酶的固定化：将活化的载体液，按40～100mg嗜热菌蛋白酶/g MCFs-NH2的加酶量，加入嗜热菌蛋白酶得到混合液，将混合液在冰浴中电磁搅拌反应18～20h或者在0～7℃、20～50W微波条件下照射2～4min，离心，取沉淀用MES-NaOH溶液洗涤，得到固定化嗜热菌蛋白酶；通过本发明方法制得的固定化嗜热菌蛋白酶在性能上比自由酶有了很大的提高，还大大地缩短了固定化时间，从20h缩短到了3min，整整缩短了399倍，这使得酶固定化的成本得到了降低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 嗜热菌 蛋白酶 固定 方法 | ||
【主权项】：
一种嗜热菌蛋白酶的固定化方法，所述方法包括：(1)载体活化：将氨基化的介孔泡沫硅载体MCFs‑NH2浸渍在0.5～2.5mM的对苯醌溶液中，在20～30℃、100～200rpm的条件下振荡活化1～3小时，离心，取沉淀依次用20～30％乙醇和纯水洗涤，洗涤后的沉淀重新分散于MES‑NaOH溶液中，得到活化的载体液；(2)酶的固定化：将活化的载体液，按40～100mg嗜热菌蛋白酶/gMCFs‑NH2的加酶量，加入嗜热菌蛋白酶得到混合液，将混合液在冰浴中电磁搅拌反应18～20h或者在0～7℃、20～50W微波条件下照射2～4min，离心，取沉淀用MES‑NaOH溶液洗涤，得到固定化嗜热菌蛋白酶；步骤(1)和(2)中所述MES‑NaOH溶液组成如下：NaCl2～5M，ZnCl210～30mM，MES‑NaOH 0.01～0.05M，pH 7.0～7.5，溶剂为水。
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