[发明专利]一种高通量快速提取真菌基因组DNA的方法

摘要

本发明提供了一种高通量快速提取真菌基因组DNA的方法。所述方法利用真菌菌块或菌丝体，经过简易的物理研磨方法，采用改良的CTAB溶液，经过处理去杂后，可得到纯化的DNA。本发明的有益效果主要体现在：(1)免除了现有方法中必须使用特殊试剂液氮进行研磨的复杂程序，(2)避免了现有方法中使用苯酚等有毒致癌试剂，(3)避免使用有毒难闻的化学试剂β-巯基乙醇，(4)本方法只需要1小时，缩短提取时间2小时，大大加快了实验速度，可实现高通量快速提取。本发明所述方法也可适用于其他各种真菌基因组DNA的快速提取。

主权项

一种高通量快速提取真菌基因组DNA的方法，所述方法按如下步骤：(1)菌丝体的裂解：从培养基上挑取真菌菌块样品，投入CTAB缓冲液中，用消毒过的研磨棒充分研磨菌块；所述CTAB缓冲液组成如下：CTAB 1～5％，NaCl 1～2mol/L，TrisCl 50～100mmol/L，EDTA10～50mmol/L，SDS 0.5～2％，PVP 0.2～1％，溶剂为去离子水；(2)RNA杂质的去除：将研磨好的样品补加CTAB缓冲液和RNase A，置于60～70℃水浴中，每隔5～10mins轻轻摇动，20～30mins后取出；(3)蛋白质杂质的去除：加入氯仿∶异戊醇体积比为24∶1的CIA液，振荡混匀1～2mins；(4)DNA的沉淀：移取上层水相于1.5mL离心管中，加入预冷的异丙醇溶液，上下颠倒几次使样品混匀，置于 20℃下20～30mins，使核酸充分沉淀；(5)DNA的溶解：离心，弃上清液，将DNA沉淀吸干水分，即得样品基因组DNA，用TE缓冲液溶解，所述TE缓冲液组成如下： 20℃保存DNA样品备用。