[发明专利]检测发酵液多糖浓度的方法有效
| 申请号： | 201110365639.6 | 申请日： | 2011-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN102507924A | 公开（公告）日： | 2012-06-20 |
| 发明（设计）人： | 韩炼;赵丹;罗芹;朱琳;赵涛;陈克平;曾令学;杨襄诚;朱聪;李洪光 | 申请（专利权）人： | 成都欧林生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/543 | 分类号： | G01N33/543;G01N21/78 |
| 代理公司： | 成都金英专利代理事务所(普通合伙) 51218 | 代理人： | 袁英 |
| 地址： | 610000 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测发酵液多糖浓度的方法，它包括以下步骤：（1）称取一定量的发酵液多糖样品；（2）收集经b型流感嗜血杆菌免疫的家兔血清，分离并用蛋白A亲和层析法纯化，待纯度为90%以上时即得兔b型流感嗜血杆菌荚膜多糖抗体；（3）用（2）中所得抗体包被酶标微孔板，制成固相抗体；（4）往微孔板中加入样品，并与用HRP标记的固相抗体结合，形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物；（5）彻底洗涤固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，加入TMB进行显色反应；（6）用酶标仪在400～500nm波长下测吸光度，计算样品中b型流感嗜血杆菌荚膜多糖浓度。本发明提供一种检测发酵液多糖浓度的方法，具有直接测量，特异性强等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 检测 发酵 多糖 浓度 方法 | ||
【主权项】：
检测发酵液多糖浓度的方法，其特征在于：它包括以下步骤：（1）称取一定量的发酵液多糖样品置于干净的容器内，样品液的浓度为10～100pg/ml；（2）收集经b型流感嗜血杆菌免疫的浓度为0.5～1.5ng/ml的家兔血清，分离并用蛋白A亲和层析法纯化，用SDS‑PAGE电泳进行纯度检测，待纯度为90%以上时，即得兔b型流感嗜血杆菌荚膜多糖抗体；（3）用（2）中所得的兔b型流感嗜血杆菌荚膜多糖抗体包被酶标微孔板，制成兔b型流感嗜血杆菌荚膜多糖固相抗体；（4）往微孔板中逐渐加入发酵液多糖样品，加入完全后与用HRP标记的兔b型流感嗜血杆菌荚膜多糖固相抗体结合，形成固相抗体‑抗原‑酶标抗体复合物，HRP的浓度为0.5～1.5ng/ml；（5）将（4）中所得的固相抗体‑抗原‑酶标抗体复合物彻底洗涤，除去未结合的酶标抗体、杂质，加入TMB进行显色反应，TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，在酸的作用下转化成黄色，颜色的深浅和样品中的b型流感嗜血杆菌荚膜多糖含量呈正相关；（6）用酶标仪在400～500nm波长下测定吸光度，通过标准曲线，计算样品中b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的浓度。
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