[发明专利]胰蛋白酶亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种人重组SPINK6蛋白的亲和层析纯化方法，其包括：将胰蛋白酶与亲和层析介质混合，偶联反应，制得胰蛋白酶亲和层析介质；将人重组SPINK6蛋白通过预先用缓冲液A平衡好的装有所述的的胰蛋白酶亲和层析介质的层析柱；然后用缓冲液A清洗上样后的胰蛋白酶亲和层析柱；再用缓冲液B将SPINK6蛋白从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰。本发明方法获得的人重组SPINK6蛋白的活性回收率为45-60％，纯度可达90％-95％，蛋白纯化倍数为10-20倍以上。本方法处理速度快、重复性好、柱效长且结合效率基本不变。

主权项

胰蛋白酶亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法，其特征在于，其包括步骤：(1)制备亲和层析介质：将胰蛋白酶与亲和层析介质混合，偶联反应，制得胰蛋白酶亲和层析介质；(2)人重组SPINK6蛋白用亲和层析介质进行纯化将人重组SPINK6蛋白通过预先用pH7.0‑9.0的缓冲液A平衡好的装有步骤(1)的胰蛋白酶亲和层析介质的层析柱；然后用pH7.0‑9.0的缓冲液A清洗上样后的胰蛋白酶亲和层析柱；再用pH 2.5‑4.5的缓冲液B将SPINK6蛋白从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰；所述pH7.0‑9.0的缓冲液A选自PBS、Tris‑HCl、硼酸缓冲液中的一种或一种以上；所述的pH 2.5‑4.5的缓冲液B选自醋酸‑醋酸钠、NaHPO4‑柠檬酸、柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液的一种或一种以上。