[发明专利]用多个微生物学指标对生物修复海区进行评价的方法

摘要

本发明提供一种用多个微生物学指标对生物修复海区进行评价的方法，本发明应用熏蒸提取-容量分析法测定沉积物样品的微生物生物量碳，静态气室法测定沉积物样品的微生物基础呼吸，埋布片法测定沉积物样品的微生物纤维素分解作用，平板计数法对沉积物样品进行细菌总数的测定，MPN-PCR方法来进行沉积物样品硝化细菌的计数，MPN-PCR方法来进行沉积物样品反硝化细菌的计数，PCR结合DGGE技术进行了微生物群落多样性分析，并根据上述微生物学指标数据对海区的生物修复效果进行评价。所需仪器设备简单，测定时间短，可以进行大批量样品测定，准确性好、稳定性高，能够满足对海区的生境修复效果进行评价。

主权项

一种用多个微生物学指标对生物修复海区进行评价的方法，该方法包括：微生物生物量碳测定方法，在该测定方法中，从生物修复海区和对照海区取得沉积物样本，于干燥器中进行熏蒸处理；转移熏蒸样品至聚乙烯塑料瓶中，于震荡机上震荡浸提，中速定量滤纸过滤，吸取少量滤液于消煮管中，加入重铬酸钾‑硫酸溶液和浓盐酸处理后瓷片混匀，消煮炉中煮沸冷却后转移至三角瓶中，滴定，计算；微生物基础呼吸测定方法，在该测定方法中，从生物修复海区和对照海区取得沉积物样本，均匀平铺于培养瓶底部，将盛有一定量氢氧化钠溶液的吸收瓶置于其中密封培养，取出吸收瓶内碱液，滴定，计算；微生物纤维素分解作用测定方法，在该测定方法中，将白布剪成布条置于H2SO4溶液中煮沸除净淀粉，取出布条洗去多余H2SO4，于烘箱内烘至恒重称重，分别从生物修复海区和对照海区取得沉积物样本平铺于培养皿中，将烘至恒重的布条平铺其上再将等量沉积物覆盖其上，培养，计算；细菌总数的测定方法，在该测定方法中，分别称取生物修复海区和对照海区沉积物样本，于试管内用灭菌陈海水梯度稀释，取稀释样品置培养基上涂匀，培养，计数；硝化与反硝化细菌MPN‑PCR计数方法，在该测定方法中，采用传统的苯酚‑氯仿抽提法对沉积物样品的细菌总DNA进行粗提，采用宝生物公司的DNA凝胶回收试剂盒对总DNA进行纯化，将此DNA进行逐级稀释，以稀释后DNA为模板进行PCR扩增，琼 脂糖凝胶电泳检测扩增结果，查MPN表，计数；微生物多样性分析方法，在该测定方法中，采用传统的苯酚‑氯仿抽提法对沉积物样品的细菌总DNA进行粗提，采用宝生物公司的DNA凝胶回收试剂盒对总DNA进行纯化，用特定引物进行巢式PCR反应，反应产物再进行V3区段扩增，扩增结果进行琼脂糖电泳检测后直接用于DGGE，采用分析软件计算电泳条带灰度值，计算香浓‑威尔指数H。