[发明专利]山羊痘病毒和绵羊痘病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种用于山羊痘病毒和绵羊痘病毒双重PCR检测试剂盒和用于山羊痘病毒和绵羊痘病毒快速鉴别检测的双重PCR方法。根据山羊痘病毒和绵羊痘病毒的基因组序列各设计一对PCR引物，可以扩增出相对应的特异性片段，实现对山羊痘病毒和绵羊痘病毒的检测与鉴别。本发明利用双重PCR技术，单管同步检测山羊痘病毒和绵羊痘病毒，降低了对山羊痘和绵羊痘的检测成本和工作量，实现了对山羊痘和绵羊痘的鉴别检测。本发明建立了一种特异性强、灵敏度高、节时省力并且易于观察结果的双重PCR方法，操作简便，特异性强、灵敏度高、可重复性高，且没有复杂的后处理。

主权项

山羊痘病毒和绵羊痘病毒双重PCR检测试剂盒，其特征是：它包括Mix PCR反应液管、阳性对照管、阴性对照管和灭菌去离子水管，其中：所述Mix PCR反应液管由以下反应液组成：序列为SEQ ID NO1的10 mmol/L的上游引物0.5 μL；序列为SEQ ID NO2的10 mmol/L的下游引物0.5 μL；序列为SEQ ID NO3的10 mmol/L的上游引物0.5 μL；序列为SEQ ID NO4的10 mmol/L的下游引物0.5 μL；10×PCR buffer 缓冲液2.5 μL；25 mmol/L MgCl2 2 μL；10 mmol/L dNTP 1 μL；5U/μL Taq DNA聚合酶0.3 μL；灭菌水14.2 μL；合计22 μL，为单次反应的用量；所述阳性对照管：管内为山羊痘病毒和绵羊痘病毒各自的重组质粒，比例为1:1，2μL～20μL，其DNA序列如下：山羊痘病毒重组质粒pMD19‑T‑G的DNA序列为SEQ ID NO5；绵羊痘病毒重组质粒pMD19‑T‑S的DNA序列为SEQ ID NO6；所述阴性对照管：管内为无羊痘病毒感染的山羊肌肉组织DNA样品，2μL～20μL；所述灭菌去离子水管：1～2mL。