[发明专利]一种制备具有抗肿瘤活性鼎湖鳞伞多糖的方法

摘要

本发明涉及一种微生物发酵法制备鼎湖鳞伞多糖的方法。该方法包括：鼎湖鳞伞一级种子培养，二级种子扩大，接种发酵，过滤获得菌丝体，所得菌丝体经过烘干、粉碎、热水浸提、乙醇沉淀、烘干等多道工序获得鼎湖鳞伞多糖。Methylene Blue法分析该多糖的抗肿瘤活性，发现其对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231以及胃癌BGC-823细胞增殖均具有显著的抑制能力。本发明的工艺方法具有工艺简单、提取条件温和、成本低、对环境友好等优点，制备的鼎湖鳞伞多糖具有显著的抑制肿瘤细胞增殖以及诱导肿瘤细胞凋亡活性，因此具有广阔的应用前景。

主权项

一种生物活性多糖的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)从土豆斜面培养基上取出菌丝体块，接种于种子培养基上，于25℃静止培养12h，摇床转速调为140rpm继续培养96小时。种子培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨3，酵母膏4，磷酸二氢钾1，硫酸镁1.5，装液量为100mL/250mL。(2)将步骤(1)制得种子无菌破碎，并进行二级扩大培养。培养基配方同(1)，培养条件为：于25℃，摇床转速为140rpm，培养96小时，装液量为100mL/250mL。(3)取步骤(2)中的种子液接种到发酵培养基中，接种量为15％(V/V)。发酵培养基配方(g/L)：葡萄糖36，玉米粉11.8，蛋白胨3，酵母膏5.4，磷酸二氢钾1.0，硫酸镁1.5；培养条件为：25℃，144小时，摇床转速为140rpm，装液量为100mL/250mL。(4)过滤得到步骤(3)中菌丝体，用去离子水冲洗菌丝体，55℃烘干，粉碎，过60目筛。(5)将步骤(4)制得的菌丝体粉中加入去离子水浸提，提取温度90℃，时间2h，提取次数3次，得提取液；(6)将步骤(5)所得提取液离心分离(离心分离条件：5000rpm，15min)，取上清液；减压浓缩至合适的体积，在浓缩液中加3倍无水乙醇，4℃沉淀过夜，离心取沉淀，离心分离条件：5000rpm，15min；(7)将步骤(6)所得沉淀物依次用丙酮、乙醚洗涤2次，55℃烘干至恒重，即为鼎湖鳞伞多糖。(8)将步骤(7)所得多糖用DMEM培养基分别配制成一系列浓度溶液，Methylene Blue法测定其对人乳腺细胞MCF‑10A、乳腺癌MCF‑7、MDA‑MB‑231、胃癌BGC‑823以及肝癌HepG2细胞体外增殖的抑制能力。