[发明专利]一种分析微藻代谢组的方法

摘要

本发明公开了一种分析微藻代谢组的方法，该方法包括：微藻细胞收集及淬灭；提取细胞内代谢物；代谢物衍生化；最后通过GC-MS对样品分析得到代谢组结果。本发明提供了一种分析微藻代谢组的手段，这种手段涉及代谢反应的终止、代谢物的提取、代谢物的分析，从而获得微藻在不同培养条件下的代谢物的定性和定量结果，为微藻代谢组的分析提供了方法，这种方法对促进微藻的代谢研究具有重要的意义。

主权项

一种分析微藻代谢组的方法，其特征是包括如下步骤：(1)微藻细胞收集及淬灭：取出已培养好的微藻藻液样品3‑5份，每份100‑150mL，4℃下3000‑5000rpm，离心3‑4min，收集下层的细胞，用3‑5mL代谢终止液在‑40℃下淬灭5‑10分钟，终止代谢反应，在‑80℃下冷冻干燥4‑6h获得冻干细胞；所述代谢终止液为含有1500mg·L‑1NaNO3，36mg·L‑1CaCl2·2H2O，75mg·L‑1MgSO4·7H2O和40mg·L‑1K2HPO4·3H2O的甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为1∶2；(2)提取细胞内代谢物：从步骤(1)获得的3‑5份冻干细胞中各取15‑25mg分别置于离心管中，每管加入1‑2mL‑40℃的代谢提取液，混匀，盖紧并放入液氮中，反复冻融3‑5次，在‑20℃下4000‑6000rpm离心1‑2min，收集上清，另向残渣中加入0.5‑1mL代谢提取液，‑20℃下4000‑6000rpm离心1‑2min，离心后，将两次上清液合并，加入10‑20μg氘标记琥珀酸，得混合液，各取200μL混合液，在‑80℃下冷冻干燥2‑4小时；所述代谢提取液为体积百分含量为50％的甲醇水溶液；(3)代谢物衍生化向步骤(2)获得的样品中各加入20mg·mL‑1的甲氧基铵盐酸盐/吡啶溶液50μL，于40℃水浴中反应60‑80min，反应结束后加入80μL N‑甲基‑N‑三甲基硅基三氟乙酰胺，于40℃水浴再反应60‑80min，8000‑12000rpm离心1min，取上清100μL放入已编号的GC进样瓶，室温放置2h；(4)GC‑MS检测采用GC‑MS对步骤(3)获得的3‑5份样品进行定性和定量处理，得到微藻代谢组分析结果。