[发明专利]一种花生四烯酸的微生物发酵方法

摘要

本发明提供一种花生四烯酸的微生物发酵方法，将产花生四烯酸的普通被孢霉菌种接于PDA斜面；固料培养基包含液体组分与固料组分，固料组分选择麸皮、大米、小米中的一种或几种，并与液体组分按10：7比例混合，80~100℃蒸煮20~30min，晾干至散开不结团；将新鲜的产花生四烯酸普通被孢霉菌种斜面加15~25mL无菌水洗下孢子，制成孢子悬液，均匀接入固料培养基，24~26℃培养2~3天，作为一级发酵的母种；以200～300ml无菌水洗下上述固料种子表面的孢子，制成孢子悬液，按体积百分比为5~10%接种量接入一级发酵罐，同时通过控制发酵前后期的温度，采用变温培养，以及在发酵过程另外补加2次辅料，促进菌体生长和油脂合成，有效提高了花生四烯酸发酵水平，缩短周期，降低成本。

主权项

一种花生四烯酸的微生物发酵方法，其步骤如下：（1）产花生四烯酸普通被孢霉发酵固料种子培养（ⅰ）菌种活化：采用斜面菌种活化，试管斜面培养基为PDA固体培养基，将产花生四烯酸的普通被孢霉菌种接于PDA斜面，24~26℃培养2~3天；（ⅱ）固料种子培养基的制备：固料培养基，包含液体组分与固料组分，其中液体组分包括：葡萄糖 7~10 g/L，酵母粉 0.5~1 g/L，蛋白胨 1~5 g/L，NaNO3 0.3~1.0 g/L，KH2PO4 0.1~1.0 g/L，维生素B1 1~3μg/L，维生素K 1~3μg/L，维生素A 1.5~2.0 μg/L，CuSO2·5H2O 0.6~1.5 μg/L，MnSO4 0.5~1.5 μg/L，ZnSO4·7H2O 1.2~1.8 μg/L，NaBr 0.44~0.66μg/L，pH 6.0~6.4之间；固料组分选择麸皮、大米、小米中的一种或几种，并与液体组分按10：7比例混合，80~100℃蒸煮20~30 min，晾干至散开不结团，按200g/瓶分装进规格为1000mL的K氏瓶中，121℃灭菌30min；（ⅲ）固料种子的培养：将新鲜斜面菌种加15~25mL无菌水洗下孢子，制成孢子悬液，倒入已灭菌固料培养基，轻摇使其尽量混匀，并于24~26℃培养2~3天，分别于12h和24h各摇匀一次，作为一级发酵的母种；（2）发酵培养（ⅰ）发酵培养基组分包括：葡萄糖20~25 g/L，酵母粉10~15 g/L，蛋白胨5~10 g/L，氯化钠10~15 g/L，硫酸铵5~8 g/L，KH2PO4  3~6 g/L，CuSO2·5H2O 1.2~1.8 μg/L，MnSO4 1.6~3.2 μg/L，ZnSO4·7H2O 2.4~3.5 μg/L，KNO3 0.66~1.5 μg/L，NaBr 0.88~1.5 μg/L，pH 5.8~6.0，121℃灭菌30min；（ⅱ）摇瓶发酵培养，即小样发酵培养以200～300ml无菌水洗下固料种子表面的孢子制成孢子悬液，按体积百分比为5~10%接种量接入摇瓶发酵培养基，培养温度为26~30℃，摇床转速150~200r/min，培养3~5天；发酵结束后收集湿菌体，烘干后提取干菌体中的油脂进行气相色谱检测，检测花生四烯酸收得率。