[发明专利]一种鉴定日本金线鱼的分子生物学方法

摘要

本发明涉及一种鉴定日本金线鱼的分子生物学方法，该方法的主要步骤为：设计鲈形目鱼类的通用引物对；用通用引物对对常见珍稀鲈形目鱼类的DNA样本进行扩增测序；依据测序结果选出每种常见珍稀鲈形目鱼类独有的DNA片段；从该DNA片段中筛选出日本金线鱼的一条特异引物；用通用引物对中的一条引物与该特异引物配对构成日本金线鱼的特异引物对；用该引物对对常见珍稀鲈形目鱼类的样本进行扩增；依据产物的电泳条带得到日本金线鱼的鉴定标准电泳条带；将通用引物对和日本金线鱼的一条特异引物相混合，构成混合引物；采用混合引物对需要鉴别的鱼类DNA样本进行扩增；依据产物的电泳条带与鉴定标准电泳条带比对，得到样本的种属鉴别结果。

主权项

一种鉴定日本金线鱼的分子生物学方法，其特征在于它包括两大步骤：(1)确定日本金线鱼的特异引物；(2)日本金线鱼种类的鉴定。步骤(1)又包括下面几个步骤：1.1设计并筛选出一对鲈形目鱼类的核糖体5.8SrRNA和28SrRNA基因间的转录间隔子DNA片段的特异引物对作为鲈形目鱼类通用引物对，该引物对为：正向引物5′‑gtcgatgaagaacgcagcta‑3′，反向引物5′‑gtcttctttccccgctgatt‑3′；1.2用步骤1.1得到的通用引物对，对鲈形目中常见珍稀鱼类的DNA模板样本进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；1.3将步骤1.2得到的常见珍稀鲈形目鱼类的PCR扩增产物进行克隆测序，根据测序结果选出每种常见珍稀鲈形目鱼类与其它常见珍稀鲈形目鱼类有差异的DNA片段；1.4从步骤1.3中所选出DNA片段区域内，为日本金线鱼设计并筛选出一条特异引物，该特异引物为：5′‑atttgacggcctaagatcta‑3′；1.5用步骤1.1所得到的鱼类通用引物对中的一条引物与步骤1.4得到的日本金线鱼的特异引物配对，构成日本金线鱼的特异引物对；1.6用步骤1.5所得到的日本金线鱼的特异引物对对鲈形目中常见珍稀鱼类的DNA模板样本进行PCR扩增；1.7将步骤1.6所得到的PCR扩增产物在琼脂糖凝胶上进行电泳，从日本金线鱼的DNA模板样本中扩增得到的产物电泳后能得到显著的条带，而对其它常见珍稀鲈形目鱼类的DNA模板样本扩增产物电泳后则没有明显的条带产生，从而得到日本金线鱼的鉴定标准电泳条带。步骤(2)又包括下面几个步骤：2.1将步骤1.1中所得的通用引物对和步骤1.4中得到的日本金线鱼的特异引物相混合，构成混合引物；2.2采用步骤2.1所得到的混合引物，对需要鉴别的鱼类DNA样本进行PCR扩增；2.3将步骤2.2所得到的PCR扩增产物在琼脂糖凝胶上进行电泳，如需要鉴别的鱼类为日本金线鱼，则电泳结果会得到两条条带，一条是通用引物扩增产物，一条是日本金线鱼特异引物扩增产物；而其它鲈形目鱼类样本只有一条由通用引物对扩增产物的带，非鲈形目鱼类样本则没有电泳条带。