[发明专利]基于量子点的植物细胞钙离子探针及其制备方法与应用

摘要

本发明公开一种基于量子点的植物细胞钙离子探针及其制备方法与应用。本发明通过将硼氢化钠和碲粉进行反应，碲粉和硼氢化钠按摩尔比1∶1.8～4配比，得到NaHTe水溶液；接着将氯化镉、巯基乙胺·盐酸盐和前述的NaHTe水溶液反应，得到橙红色澄清的CdTe/MA QDs溶液；再将EDC、EGTA和前述的CdTe/MA QDs溶液反应，得到基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA，并用于监测拟南芥叶肉细胞中钙离子浓度水平变化。本发明基于量子点的发光特性，在量子点的表面引入EGTA，获得一种能特异性识别钙离子的探针。该探针具有抗光漂白性，能特异性识别钙离子，且灵敏度比传统荧光染料探针Fluo-3高。本发明提供的制备方法，反应条件简单，操作方便，得到的探针有利于实时监测细胞内游离钙离子浓度。

主权项

一种基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法，其特征在于包含以下步骤：(1)制备碲氢化钠：将N2饱和的二次蒸馏水和硼氢化钠混合后，再加入碲粉，于25～60℃水浴下恒温反应10～60min，待黑色Te粉完全消失，溶液呈无色透明后置于4～8℃反应10～60min，底部出现白色沉淀硼酸钠，得到的上清液即为无色透明的NaHTe水溶液；其中，碲粉和硼氢化钠按摩尔比1∶1.8～4配比；(2)制备CdTe/MA量子点：在通过氮气除氧得到的二次蒸馏水中依次加入氯化镉和巯基乙胺·盐酸盐，将pH值调为5.0～6.0后继续通氮后注入步骤(1)制备的NaHTe水溶液，于50～120℃恒温回流10～90min，得到橙红色澄清的CdTe/MA QDs溶液，于4～8℃保存；其中，氯化镉、NaHTe水溶液以及巯基乙胺·盐酸盐的用量按照如下方法计算：Cd2+、Te‑和MA按摩尔1∶(0.1～0.5)∶(2～3)配比；(3)制备基于量子点的植物细胞钙离子探针：将碳二亚胺溶于乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸碱性水溶液中，置于25～60℃水浴中搅拌活化1～10min后，在均匀搅拌下加入步骤(2)制备的CdTe/MA QDs溶液，避光继续搅拌反应10～60min；反应结束后，于4～8℃放置过夜终止反应，得到基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA‑EGTA；其中，碳二亚胺、乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸和CdTe/MA QDs溶液的用量按照如下方法计算：CdTe/MA QDs以步骤(2)中加入的巯基乙胺计，碳二亚胺、乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸和CdTe/MAQDs按摩尔比1∶(0.5～2)∶(0.5～4)配比。