[发明专利]枸杞多糖提取物中枸杞多糖的检测方法

摘要

枸杞多糖提取物中枸杞多糖的检测方法，其步骤为：⑴制备6种单糖的对照品溶液；⑵将对照品溶液制备成可供气相色谱分析的试样，检测对照品溶液，得出对照品色谱图和标准曲线；⑶制备供试品；⑷在与对照品相同的色谱条件下对供试品进行检测，得出供试品色谱图；⑸将供试品检测出的色谱图与对照品色谱图进行比对，计算出每种单糖含量；⑹根据单糖含量配制6种单糖混合标准溶液，绘制标准曲线；⑺供试品用紫外分光光度计测定吸光值，计算枸杞多糖含量；本方法通过测定枸杞多糖的单糖组成，可以鉴别枸杞多糖的真伪；采用单糖混合标准溶液制作标准曲线，相对于以葡萄糖为标准溶液制作标准曲线，克服了各种单糖显色程度不一致导致的误差，结果更客观准确。

主权项

1.枸杞多糖提取物中枸杞多糖的检测方法，其特征在于包括下述步骤：a.气相色谱法对照品溶液的制备内标溶液：精密称取赤藓醇约2mg，用吡啶溶解定容到10ml，混匀备用；混合单糖贮备液：精密称取葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖各约10mg，用吡啶溶解定容到10ml，混匀备用；b.对照品溶液的检测①色谱条件气相色谱仪：Agilent 6890N 色谱柱:DB－1701毛细管色谱柱，30m×0.32mm×0.25μm进样口条件：载气为氮气，纯度大于99.999%；温度250℃；分流模式，分流比20:1柱温箱条件：初温190℃，保持5min，以8℃/min升到260℃柱参数：恒流模式，流速1.5ml/min检测器条件:氢火焰检测器,温度260℃，H2流量30ml/min，Air流量350ml/min，尾吹气氮气流量25ml/min理论塔板数以赤藓醇计不低于5000；②检测方法在混合单糖贮备液中加入赤藓醇内标溶液0.1ml，混匀，加入10mg 盐酸羟胺，充分振荡溶解，于90℃水浴反应30min，取出，冷却到室温，加入1ml无水醋酸酐，于90℃水浴酰化反应30 min，取出冷却后真空浓缩蒸干，残渣加入1ml氯仿溶解，进行气相色谱分析，自动进样器进样，进样量1ul，得出对照品色谱图；c.供试品的制备称取 10 mg枸杞多糖提取物样品于安瓿瓶中，加入2ml2 mol/L的三氟乙酸，封管后置于120℃干燥箱中水解，2h后取出冷却，离心后取上清液，真空浓缩至干，得枸杞多糖水解产物，置于干燥箱中备用；在上述备用的枸杞多糖水解产物中，加入10mg 盐酸羟胺及1ml无水吡啶，加入内标溶液0.1ml；充分振荡溶解，于90℃水浴反应30min，取出，冷却到室温，加入1ml无水醋酸酐，于90℃水浴酰化反应30min，取出冷却后真空浓缩蒸干，残渣加入1ml氯仿溶解，得供试品溶液；d.供试品的检测取上述待测供试品溶液1ml，置自动进样器样品瓶中，在与对照品溶液检测相同的色谱条件下自动进样分析,得出供试品图谱；e.检测结果分析将供试品检测出的色谱图与对照品色谱图进行比对,对色谱峰进行确认、定性；以赤藓醇对应的谱峰作为内标,并根据相应峰面积用内标法计算出各单糖的含量；f.硫酸苯酚法对照品溶液的制备根据步骤f中检测出的枸杞多糖中单糖组成及含量，按组成比例分别精确称取6种单糖标准物质共约12mg至100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀得含糖0.12mg/ml的糖对照品溶液；g．标准曲线的制作精密吸取溶液0.1ml，0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1ml，分别置10 ml具塞比色管中，加水补至2ml，加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5ml，摇匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出冷却至室温，以相应试剂为空白，490nm波长处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，糖对照品溶液不同的稀释浓度C为横坐标，绘制糖对照品标准曲线C=kA+b；h.供试品溶液的制备称取枸杞多糖提取物样品约0.25g，于150ml具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水20ml，超声溶解，取1ml溶液于50ml离心管中，加入无水乙醇19ml使溶液含醇量为95%，涡旋混匀，于离心机中，以9600转/分，离心15分钟，弃去上清液，残渣加水溶解，定容至100ml，作为供试品溶液备用；i.供试品的检测精密吸取供试品溶液1ml，加水至2ml，照g步骤中标准曲线的制备项下的方法，自“加入5%苯酚溶液1ml”起，依上述方法测定吸光度A₁，     从糖对照品标准曲线上读出吸光度A₁所对应的供试品溶液中糖的浓度，并依式X%=*100%计算出枸杞多糖含量；其中C：按标准曲线C=kA+b计算出的浓度，g/L；M：取样量，g。