[发明专利]一种提取Bt杀虫蛋白晶体的方法无效
| 申请号： | 201110408518.5 | 申请日： | 2011-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN102492027A | 公开（公告）日： | 2012-06-13 |
| 发明（设计）人： | 刘波;阮传清;朱育菁;刘芸;唐建阳 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院农业生物资源研究所 |
| 主分类号： | C07K14/325 | 分类号： | C07K14/325;C07K1/14 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350003 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种成本低、安全、操作简单的提取Bt杀虫蛋白晶体的方法。该方法包括发酵原液的前处理和提取蛋白质晶体。本发明的Bt杀虫蛋白晶体的提取量大，操作简单，成本低、安全，适合工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提取 bt 杀虫 蛋白 晶体 方法 | ||
【主权项】：
一种提取Bt杀虫蛋白晶体的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：（1）发酵原液的前处理：苏云金芽孢杆菌发酵完毕后，将发酵液1500‑3000 r/min离心1 min；滤液经1000 r/min、4℃离心1.5‑2min,除去沉淀；上清液通过10000 r/min、4℃离心15min，将收集到的沉淀溶于含有0.1%（v/v）TritonX‑100的生理盐水中，然后继续在10000r/min、4℃下离心15min，沉淀用生理盐水洗涤，甩去多余水份后收集沉淀备用；（2）提取蛋白质晶体将步骤（1）收集的沉淀与PEG、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾混合，加水溶解形成混合液，使最终浓度分别为：沉淀24g/L、PEG 120 g/L、磷酸氢二钾90 g/L，磷酸二氢钾30g/L，边搅拌边调节混合液pH 至8.5，在1440r/min,15℃下离心2min，除去上清液，加水补足至与上述混合液等体积，然后再次加入占混合液总体积9%（w/v）的磷酸氢二钾和3%（w/v）的磷酸二氢钾进行二次萃取，在4500r/min,4℃下离心15‑20 min，收集沉淀部分，加入生理盐水洗涤，收集Bt晶体蛋白质，将其溶于生理盐水中，于‑20℃下冻存。
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