[发明专利]一种制备固定化腈水解酶的方法

摘要

一种制备固定化腈水解酶的方法，属于固定化酶技术领域。本发明以市售腈水解酶为原料，市售赖氨酸-大孔离子交换树脂为载体，经固定、抽滤、洗涤的简单工艺制得成品。本发明方法简单易行，反应条件温和，设备简单易得，无“三废”排放，充分利用物质资源，生产成本低，便于推广应用；本产品空间位阻效应小，热稳定性高，使用范围广，使用寿命长。本发明可广泛应用于制备固定化酶，采用本发明方法制备出的产品，可广泛应用于生物降解、生物修复、医药、化工、农业等行业中。

主权项

一种制备固定化腈水解酶的方法，其特征在于所述方法的具体步骤如下：(1)腈水解酶的预处理以市售腈水解酶为原料，按照市售腈水解酶的质量∶缓冲溶液的体积比为1g∶8～10mL的比例，将市售腈水解酶加入到缓冲溶液中，搅拌溶解30～40分钟后再泵入抽滤机中，进行抽滤，分别收集抽滤液和抽滤渣，其中，所述的缓冲溶液为pH值为8～11的pH 8.0的硼砂‑氯化钙缓冲溶液或pH 9.0的硼砂‑氯化钾缓冲溶液或pH 10.8的硼砂‑碳酸钙缓冲溶液；(2)制备固定化腈水解酶粗品第(1)步完成后，按照市售赖氨酸‑大孔离子交换树脂载体的质量∶第(1)步的收集抽滤液的体积∶戊二醛质量浓度为25％的戊二醛溶液的体积比为1g∶2～3mL∶0.5～0.8mL的比例，先将赖氨酸‑大孔离子交换树脂载体加入缓冲溶液中，浸泡2～3小时，再加入第(1)步收集抽滤液和戊二醛溶液，搅拌均匀后，升温至30～45℃，恒温反应6～7小时，进行固定化酶反应，反应完成后通过抽滤机进行抽滤，分别收集抽滤渣和抽滤液，其中，所述的缓冲溶液为pH值为8～11的pH 8.0的硼砂‑氯化钙缓冲溶液或pH 9.0的硼砂‑氯化钾缓冲溶液或pH 10.8的硼砂‑碳酸钙缓冲溶液；(3)制备固定化腈水解酶第(2)步完成后，将第(2)步收集的抽滤渣，按照抽滤渣的质量∶蒸馏水的体积之比为1g∶4～5mL的比例，用蒸馏水对抽滤渣进行洗涤，分别收集洗涤渣和洗涤液，对于收集的洗涤渣，即为制备出的固定化腈水解酶，放置于4～6℃下保存；(4)再生处理第(3)步完成后，将第(2)步收集的抽滤液，泵入截留分子量为1000～5000Da的纳滤器中，在压力为0.1～0.4MPa的条件下，进行纳滤，直至纳滤截留液体积减少至原体积的10～30％时止，分别收集纳滤滤过液和纳滤截留液。