[发明专利]一种气液接触式卷烟全烟气暴露下的细胞毒性检测方法

摘要

一种气液接触式卷烟全烟气暴露下的细胞毒性检测方法，属于卷烟烟气安全性评价技术领域。本发明检测方法首先设定卷烟抽吸参数进行卷烟的抽吸，烟气经流速为0-1000mL/min的洁净空气稀释，稀释的卷烟全烟气进入专利号为ZL201120063251.6的全烟气暴露瓶内，和瓶中的悬浮细胞进行接触暴露，暴露时间均是5min；暴露后按常规方法进行中性红细胞毒性试验或MTT细胞毒性试验；烟气暴露量和细胞毒性的剂量反应关系按以下式分析：全烟气的稀释倍数＝(烟气流速+洁净空气流速)/烟气流速；10mL的细胞悬浮液暴露5min时的烟气暴露量＝单支卷烟的TPM量/单支卷烟的抽吸口数×6口/10mL；细胞毒性的大小用细胞抑制率CI表示。本发明具有简单易行，成本低，为卷烟烟气安全性评价提供技术支持的优点。

主权项

一种气液接触式卷烟全烟气暴露下的细胞毒性检测方法，其特征在于该方法的步骤如下：a.按常规方法传代培养CHO细胞，并制备CHO细胞悬浮液，细胞浓度是(5‑10)×104个/mL，并将之分装至专利号为ZL201120063251.6的全烟气暴露瓶内，10mL/瓶；b.将全烟气暴露瓶置于37℃恒温水浴锅内，并和洁净空气瓶及直线型吸烟机连接；c.在吸烟机控制面板上按照国标GB/T 16450设定卷烟抽吸参数；d.按c步骤设定的卷烟参数进行卷烟的抽吸，再经流速为0‑1000mL/min的洁净空气稀释的卷烟全烟气的暴露，暴露时间均是5min；暴露完毕，取下全烟气暴露瓶，进行中性红细胞毒性试验或MTT细胞毒性试验；e.细胞毒性检测：(1)中性红细胞毒性试验将暴露完毕的细胞悬浮液转移至离心管内，1000rpm/min转速下离心5‑10min；移除上清液，加入新鲜的常规生长培养基10mL，制成细胞悬浮液，并将之接种至96孔细胞培养板内，置于CO2培养箱内培养24h，后按常规方法进行中性红细胞毒性试验；(2)MTT细胞毒性试验按步骤e.(1)的操作将CHO细胞悬浮液种植96孔细胞培养板，置于CO2培养箱内培养24h，后按常规方法进行MTT细胞毒性试验；f.结果分析该暴露方式下，烟气暴露量和细胞毒性的剂量反应关系按以下步骤分析：(1)全烟气的稀释倍数＝(烟气流速+洁净空气流速)/烟气流速；(2)在直线型吸烟机上分析单支受试卷烟的烟气总粒相物TPM量和抽吸口数，则每口的TPM量＝单支卷烟的TPM量/单支卷烟的抽吸口数；暴露时间5min时的抽吸口数是6口，则10mL的细胞悬浮液暴露5min时的烟气暴露量＝单支卷烟的TPM量/单支卷烟的抽吸口数×6口/10mL；(3)根据上述公式分析烟气暴露量和细胞毒性间的剂量反应关系，细胞毒性的大小用细胞抑制率CI表示。