[发明专利]结核分枝杆菌海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2的表达纯化及与磷酸复合体的晶体三维结构

摘要

本发明涉及结核分枝杆菌海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2的表达、纯化和结晶方法；以及海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2硒代蛋白质的载体构建、表达和纯化方法，具体地说就是将OtsB2的29位和133位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，在大肠杆菌B121(DE3)中使用特殊培养基大量表达硒代蛋白OtsB2；以及海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2与磷酸根的复合体的结晶方法；以及海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2与磷酸根的复合体晶体三维结构及其在结核分枝杆菌药物筛选及药物设计方面的应用。

主权项

一种结核分枝杆菌海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2的晶体或所述结核分枝杆菌海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2与磷酸根复合体的晶体，其中所述海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第29和133位突变为甲硫氨酸后的氨基酸序列，且所述结核分枝杆菌海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2的晶体具有P2(1)2(1)2(1)的空间群，晶胞参数为:a＝42埃，b＝89埃，c＝105埃，α＝β＝γ＝90°，所述结核分枝杆菌海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2与磷酸根复合体为所述结核分枝杆菌海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2与一个游离磷酸根结合的复合体，所述结核分枝杆菌海藻糖‑6‑磷酸磷酸酶OtsB2与所述磷酸根的相互作用如图2中的C。