[发明专利]野生型和突变体hFⅨ毕赤酵母表达载体及构建方法和应用无效
| 申请号： | 201110435501.9 | 申请日： | 2011-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN103173482A | 公开（公告）日： | 2013-06-26 |
| 发明（设计）人： | 张同存;周俊;王震宇;戴永刚;成彩莲;唐文心 | 申请（专利权）人： | 武汉科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C07K14/745;C12P21/02;C12R1/84 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 441439 湖北省武汉市武汉科*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种野生型和三种突变体hFⅨ在毕赤酵母中的表达载体的构建方法及应用，其步骤：根据Genebank提供的基因序列，用RT-PCR技术从健康人肝脏中克隆出hFⅨ全长cDNA序列，构建用于毕赤酵母表达的融合了酵母α-factor信号肽和全长hFⅨ序列的酵母表达质粒pPIC9K-hFⅨ，将该质粒转入毕赤酵母SMD1168中，筛选出高表达的酵母菌株。继而构建酵母表达质粒pPICZA-hFⅨ，在此基础上设计并构建三种酵母菌hFⅨ高活性突变体，电转入毕赤酵母SMD1168中，筛选出高表达的酵母菌突变株。得到的各种hFⅨ酵母表达载体凝血活性均高于标准hFⅨ。野生型hFIX(pPIC9K-hFⅨ)经50L中试发酵研究，蛋白纯化产物分泌表达量最高可达558mg/L，纯度和凝血活性均较高。 | ||
| 搜索关键词： | 野生型 突变体 hf 酵母 表达 载体 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种分离的质粒，其序列为SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列。
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