[发明专利]新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的分组纯化方法

摘要

本发明提出一种新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的分组纯化方法，其应用于新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的纯化过程，所述纯化过程包括OECs的取材；OECs的分离：OECs分组纯化及比较；形态学观察以及OECs纯度检测。本发明通过不同的的新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的纯化方法实验，结果显示体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三级细胞，其突起细长。未经纯化的OECs则成纤维细胞生长迅速而占优势，三种纯化方法均能使接种14d后的OECs纯度均值大于75％。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法的纯化率均值略高于差速贴壁法。故新生大鼠嗅球OECS的原代培养中细胞纯化是必要的；在脊髓损伤再生研究中，较之p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法，差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。

主权项

一种新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的纯化过程的分组纯化方法，所述纯化过程包括OECs的取材，OECs的分离，OECs分组纯化，形态学观察以及OECs纯度检测；所述分组纯化方法为将大鼠取材后分为正常对照组、免疫吸附组、化学药物组和差速贴壁组进行纯化步骤；其中，所述免疫吸附组的纯化方法为：将OECs细胞悬液接种于预先包被p75抗体(1μg/ml，室温下1h)的25cm2玻璃培养瓶内培养15min，去除含未吸附细胞的培养基，用生长培养液洗涤5次，0.125％的胰蛋白酶消化，生长培养液调整细胞浓度为5×105/ml后重新种植于预先包被多聚赖氨酸(50μg/ml，室温下1h)的24孔细胞培养板内，余同他组；所述化学药物组的纯化方法为：将OECs细胞悬液接种于预先包被多聚赖氨酸(50μg/ml，室温下1h)的24孔细胞培养板内培养3d后加入作用浓度为10μmol/L的阿糖胞苷(Ara2C)以抑制成纤维细胞等分裂迅速的细胞，48h后用培养液间隔15min洗3次，以去除Ara2C，余同他组；以及所述差速贴壁组的纯化方法为：将OECs细胞悬液接种于无包被处理的25cm2玻璃瓶内培养18h后将悬液细胞液吸出，移入另一个无包被处理的25cm2玻璃培养瓶内培养36h；重新种植于预先包被多聚赖氨酸(50μg/ml，室温下1h)的24孔培养板内培养2天，余同他组。