[发明专利]新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的分离方法

摘要

本发明提出一种新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的分离方法，其应用于OECs的纯化过程，所述纯化过程包括OECs的取材；OECs的分离：OECs分组纯化及比较；形态学观察以及OECs纯度检测。本发明通过不同的新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的纯化方法实验，结果显示体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三级细胞，其突起细长。未经纯化的OECs则成纤维细胞生长迅速而占优势，三种纯化方法均能使接种14d后的OECs纯度均值大于75％。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法的纯化率均值略高于差速贴壁法。故新生大鼠嗅球OECS的原代培养中细胞纯化是必要的；在脊髓损伤再生研究中，较之p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法，差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。

主权项

一种新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的分离方法，其应用于嗅球嗅鞘细胞的纯化过程，所述纯化过程的步骤包括OECs的取材；OECs的分离：OECs分组纯化；形态学观察以及OECs纯度检测；其中所述OECs的分离方法包括：将位于嗅球最外层的嗅神经层的嗅小球层以及少量连接的嗅神经轻轻剥下，用PBS液冲洗2遍，剪碎组织块，用浓度为0.125％的胰蛋白酶消化液在37℃下消化15min，经胰酶消化的组织小块移入生长培养液(20％小牛血清的DMEM/F212)中，静置10min，以中和胰酶作用；离心(800r/min，3min)去除上清液，吸取管底的组织小块，生长培养液清洗2次；将组织小块移入2ml的生长培养液中，再用火焰抛光后的Pasteur移液管反复吹打组织块15～20次，使之形成细胞悬液；以及取一滴细胞悬液滴于细胞计数板计数，用生长培养液调整细胞浓度为5×105/ml。