[发明专利]骨髓间充质干细胞分化诱导过程中的细胞免疫荧光染色方法

摘要

本发明提出一种骨髓间充质干细胞分化诱导过程中的细胞免疫荧光染色方法，其应用于骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的全反式维甲酸联合细胞因子诱导过程，所述诱导过程应用全反式维甲酸(ATRA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞，不仅具有了神经细胞的典型形态，并表达神经元标志抗原神经元特异性烯醇化酶、星型胶质细胞标志抗原胶质纤维酸性蛋白；提示BMSCs仍然保留了跨胚层分化为非间充质细胞的能力，可使跨胚层分化为神经元样细胞，有望成为神经细胞替代治疗的种子细胞。

主权项

一种骨髓间充质干细胞分化诱导过程中的细胞免疫荧光染色方法，其用于骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的全反式维甲酸联合细胞因子诱导过程，所述诱导过程包括分离培养细胞、BMSCs的形态学观察、流式细胞仪检测抗原表达、诱导分化实验以及细胞免疫荧光染色，所述细胞免疫荧光染色方法为：将培养细胞在诱导分化3天后采用免疫荧光染色；贴壁细胞去培养基，用PBS洗3次，经4％的多聚甲醛固定30min，PBS洗涤3次，0.3％TritonX‑100处理20min，PBS漂洗3次，10％羊血清室温封闭20min，吸出血清，分别加入兔抗人NSE(1∶500)、GFAP(1∶1000)，37℃孵育2h，然后PBS洗3次，加入羊抗鼠‑FITC(1∶500)孵30min；以及显色后在荧光显微镜下观察。