[发明专利]沙眼衣原体、解脲脲原体、细小脲原体和淋球菌的检测试剂盒

摘要

本发明提供了一种沙眼衣原体、解脲脲原体、细小脲原体和淋球菌的检测方法和试剂盒，其特征在于：使用了MAP方法设计引物，每条引物由3段构成，此设计能使引物的退火温度变得宽泛；对于每个病原体设计了4个引物，扩增反应包括富集阶段和扩增阶段，扩增时仅有内引物标记生物素并且过量；提供了固体形式存在的PCR反应物，预制的生物素标记探针的尼龙膜和阳性对照品。

主权项

一种沙眼衣原体、解脲脲原体、细小脲原体和淋球菌的检测方法和试剂盒，其特征在于包括固体形式存在的10x PCR反应物(由引物混合物、tris‑cl、Kcl、MgCl2、热启动聚合酶、UNG酶和冻干保护剂组成)、阳性对照品和含有生物素标记探针的尼龙膜；其特殊之处在于：a：特殊的三段式引物，其三段式引物设计及后继的扩增为独创的MAP(多重单链PCR扩增)技术，其序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16；b：特殊的探针，所选取的4个探针具有良好的特异性和保守性，即可以区分不同的病原体，又可以检出特定的病原体，分别为SEQ ID NO.17，SEQ IDNO.18，SEQ ID NO.19，SEQ ID NO.20；c：特殊的存储条件：本试剂盒为PCR反应物提供了固体形式的存储方式；d：反应条件通过优化，大致分为两个阶段，其中第一阶段为富集阶段，本阶段使用浓度极低的3个引物和一个过量的正向引物，反应温度一般为50℃左右，扩增阶段低浓度引物将被消耗完，随后第二阶段仅有正向引物工作，随着扩增的进行，将产生大量的单链目的核苷酸序列；e：对于每个位点，本试剂盒提供了2对引物或2对以上引物进行靶序列富集，这样使其特异性和敏感性大大增强；f：本试剂盒包括了预处理的标记探针的尼龙膜。