[发明专利]一种转录激活子样效应因子的固相合成方法

摘要

一种转录激活子样效应因子的固相合成方法，包括以下步骤：将一段核酸适配序列(DNAlinker)固定化到固相界面上，用限制性内切酶剪切产生3′-粘性末端；将产物与经限制性内切酶处理过的具有5′-粘性末端的TALE连接单元接触，在DNA连接酶的作用下连接，洗脱未连接底物；用限制性内切酶处理上一步骤所得产物，在DNA上剪切重新生成一个3′-粘性末端，再与经限制性内切酶处理过的具有5′-粘性末端的TALE连接单元接触，在DNA连接酶的作用下连接，洗脱未连接底物；重复操作上述步骤至少一次；用限制性内切酶将连接好的DNA分子从固相界面上剪切下来，分离纯化，除去未连接底物；将所得DNA分子表达成蛋白分子，即为含目标TALE的融合蛋白(如TALEN，或者TALEA)。

主权项

一种转录激活子样效应因子(Transcription Activator Like Effectors，TALE)的固相合成方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将一段核酸适配序列(DNA Linker)固定化到固相界面上，用限制性内切酶3a剪切产生3′‑粘性末端；(2)将步骤(1)的产物与经限制性内切酶5a处理过的具有5′‑粘性末端的TALE连接单元接触，在DNA连接酶的作用下连接，洗脱未连接底物，上述5′‑粘性末端具有与DNA Linker上3′‑粘性末端互补配对的核苷酸序列；(3)用限制性内切酶3b处理上一步骤所得产物，在DNA上剪切重新生成一个3′‑粘性末端，再与经限制性内切酶5b处理过的具有5′‑粘性末端的TALE连接单元接触，在DNA连接酶的作用下连接，洗脱未连接底物；上述5′‑粘性末端具有与上述3′‑粘性末端互补配对的核苷酸序列；(4)重复步骤(3)至少一次；(5)用限制性内切酶将连接好的DNA分子从固相界面上剪切下来，分离纯化，除去未连接产物；(6)将步骤(5)所得DNA分子连接到一定表达载体上，表达成蛋白分子，即为含目标TALE的融合蛋白(如TALEN，或者TALEA)。