[发明专利]用于纯化聚乙二醇化的促红细胞生成素的方法有效

专利信息
申请号: 201180044060.8 申请日: 2011-09-13
公开(公告)号: CN103118708A 公开(公告)日: 2013-05-22
发明(设计)人: 罗伯托·法尔肯施泰因;沃尔夫冈·克恩莱因;沃尔夫冈·库内;哈特穆特·舒里希(死亡) 申请(专利权)人: 霍夫曼-拉罗奇有限公司
主分类号: A61K47/48 分类号: A61K47/48;B01D15/36
代理公司: 中科专利商标代理有限责任公司 11021 代理人: 王旭;吴小明
地址: 瑞士*** 国省代码: 瑞士;CH
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摘要: 本文报道了一种通过阳离子交换色谱法从反应副产物或未反应的原料中纯化蛋白的方法,所述蛋白包含促红细胞生成素和单个聚(乙二醇)残基。已经发现,通过采用调节至21mS/cm的电导率的阳离子交换SP SephacrylS500HR色谱材料和线性梯度洗脱,可以在单个步骤中以高纯度和收率获得促红细胞生成素和单个聚(乙二醇)残基的融合蛋白。
搜索关键词: 用于 纯化 聚乙二醇 红细胞 生成 方法
【主权项】:
一种用于获得蛋白的方法,所述蛋白包含促红细胞生成素和单个聚(乙二醇)残基,所述方法包括下述步骤:a)将溶液施加于包含SP Sephacryl S500HR色谱材料的柱,所述溶液包含促红细胞生成素以及促红细胞生成素与聚(乙二醇)的缀合物的混合物,在所述缀合物中每个促红细胞生成素分子具有一个或多个聚(乙二醇)残基,所述柱已经施加了具有约21mS/cm的电导率的溶液,b)将具有约21mS/cm的电导率的溶液施加于所述柱,由此回收游离的聚(乙二醇)和包含2个或更多个聚(乙二醇)残基的蛋白,c)向所述柱施加溶液,并由此分别回收包含促红细胞生成素和单个聚(乙二醇)残基的蛋白和促红细胞生成素,其中首先回收包含促红细胞生成素和单个聚(乙二醇)残基的蛋白,所述溶液具有线性地递增的一直到约62.5mS/cm的最终值的电导率。
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