[发明专利]改善的光-发射分子

摘要

本发明公开的是具有改善的光‑发射活性的萤光素酶多肽和它们的编码核酸。这些分子有用于一系列测定包括基于萤光素酶的基因报告子测定，生物发光共振能量转移测定，蛋白互补测定和将萤光素酶用作可检测的和/或可定量的标记物的其他应用。也公开的是增加萤光素酶‑催化的反应的灵敏度和/或改善萤光素酶‑催化的反应的动力学以及降低不期望的变量的影响的方法和组合物。

主权项

1.制备修饰的挠足虫萤光素酶多肽的方法，其包括修饰SEQ ID NO:792的氨基酸序列，所述修饰包括选自下列的至少一个修饰：(a)L，在至少一个对应于共有序列SEQ ID NO:905的第85或98位的位置，及下列中的至少一个：(i)选自下列的基序：在C6的RCE、KCA或KCE，在C6的RCEE或KCEE，在C6的RCED、KCAD或KCED，在C6和/或C10的ERC，在C6的RC或KC，在C10的GRC，在C5和/或C6的RCA，在C6的RCAE或KCAE，在C5和/或C6的RCAD，及在C9的KCSD，其中C5、C6、C9和C10是共有序列SEQ ID NO:905的保守的半胱氨酸；且其中A是丙氨酸，R是精氨酸，E是谷氨酸，D是天冬氨酸，G是甘氨酸，S是丝氨酸，且K是赖氨酸；以及(ii)跨信号肽序列的下游和共有序列SEQ ID NO:905的第74、75、76、77、78或79位的氨基酸残基的上游的氨基酸序列的全体缺失；或者(b)选自下列的基序：在C10的ERC，在C5的RCA，在C5和/或C6的RCAD，及在C9的KCSD，其中C5、C6、C9和C10是共有序列SEQ ID NO:905的保守的半胱氨酸；以及任选地还包括下列之至少一个：(i)L，在至少一个对应于共有序列SEQ ID NO:905的第85或98位的位置；以及(ii)跨信号肽序列的下游和共有序列SEQ ID NO:905的第74、75、76、77、78或79位的氨基酸残基的上游的氨基酸序列的全体缺失由此产生修饰的挠足虫萤光素酶多肽。