[发明专利]鉴定优质抗虫杂交棉中棉所70品种真实性和／或品种纯度的SSR分子标记方法

摘要

本发明公开了一种鉴定优质抗虫杂交棉“中棉所70”种子真实性和／或品种纯度的SSR标记方法，其包括以下步骤：（1）提取棉花杂交种“中棉所70”及其亲本种子或幼苗叶片基因组DNA；（2）以第（1）步提取的基因组DNA为模板，用SSR引物进行PCR扩增；（3）对扩增产物进行凝胶电泳；（4）对电泳结果进行分析，如果同时具有父母双亲本特异条带的种子或单株鉴定为真正的杂交种，缺少其中的任意一个条带均被视为假杂种。本发明方法重复性好、多态性高、遗传稳定、不受环境条件影响，而且检测结果稳定可靠、快速准确、操作简单方便、成本低廉，有利于大规模的快速检测。

主权项

一种鉴定优质抗虫杂交棉 “中棉所70”种子真实性和／或品种纯度的SSR标记方法，其特征在于包括以下步骤：（1）提取棉花杂交种“中棉所70”及其亲本种子或幼苗叶片基因组DNA；（2）以第（1）步提取的基因组DNA为模板，用SSR引物CGR5390、BNL1552、CGR5111和CIR246中的一个或多个引物，进行PCR扩增，其中，4个SSR特征引物碱基序列为： CGR5390引物其正向序列如SEQ ID No.1所示，反向序列如SEQ ID No.2所示；BNL1552引物其正向序列如SEQ ID No.所示，反向序列如SEQ ID No.4所示，CGR5111引物其正向序列如SEQ ID No.5所示，反向序列如SEQ ID No.6所示；CIR246引物序列如SEQ ID No.7所示，反向序列如SEQ ID No.8所示；（3）对扩增产物进行凝胶电泳；（4）对电泳结果进行分析，如果同时具有父母双亲本特异条带的种子或单株鉴定为真正的杂交种，缺少其中的任意一个条带均被视为假杂种，其中，4个SSR引物产生的特异标记带大小为：SSR引物CGR5390产生的母本特异标记CGR5390205，条带大小为205bp，产生的父本特异标记CGR5390190，条带大小为190bp；SSR引物BNL1552产生的母本特异标记BNL1552175，条带大小为175bp，产生的父本特异标记BNL1552180，条带大小为180bp；SSR引物CGR5111产生的母本特异标记CGR5111135，条带大小为135bp，产生的父本特异标记CGR5111128，条带大小为128bp；SSR引物CIR246产生的母本特异标记CIR246200，条带大小为200bp，产生的父本特异标记CIR246190，条带大小为190bp。