[发明专利]一种医用脂肪乳培养液制备肝细胞脂肪变性模型的方法

摘要

本发明采用高血清培养液与医用脂肪乳培养液制备肝细胞脂肪变性模型，改进了实验方法和操作，高血清和医用脂肪乳两种方法不仅从显微镜下观察到脂滴、脂滴融合的现象，还检测到了肝细胞内TG、TC的含量，经统计学处理发现两种方法均可成功建立脂肪变性肝L-02细胞模型。将二法分别作用于正常L-02细胞培养48h后发现：与正常组相比，医用脂肪乳诱导较高血清诱导的肝细胞内TG、TC含量均明显升高(P＜0.01)，且医用脂肪乳在各大医院均可购买，价格低廉，故将医用脂肪乳培养正常肝细胞诱导成脂肪变性肝细胞的方法作为本发明的造模方法。

主权项

一种医用脂肪乳培养液制备肝细胞脂肪变性模型的方法，其特征在于，包括如下步骤：A.培养液及医用脂肪乳培养液的配制：培养液1的配制：将1.69g 4‑羟乙基哌嗪乙磺酸，150mg L‑谷氨酰胺，165mg丙酮酸钠，2gNaHCO3和10.0g RPMI‑1640粉末加入1L水中，室温配制成溶液，加pH调节剂调节pH至7.20，过滤并除菌分装，低温保存备用；培养液2的配制：将50mL的胎牛血清与450mL上述培养液1混匀，低温保存备用。培养液3的配制：将1mL的胎牛血清与499mL上述培养液1混匀，低温保存备用；250mL医用脂肪乳配方：50g大豆油、3g卵磷脂，5.5g甘油，余量的水；医用脂肪乳诱导液的配制：将10mL的胎牛血清与5mL的上述医用脂肪乳混匀，用上述培养液1定容至100mL；B.取对数生长期的L‑02肝细胞，用0.25％(w/v)胰蛋白酶消化，细胞计数后用培养液2配成单个细胞悬液，以每孔3×105个细胞的密度接种于6孔培养板中，每孔培养液2的体积为2mL；将培养板移入CO2培养箱中，在37℃、5％CO2(v/v)及饱和湿度条件下，培养48小时使其充分贴壁生长，待细胞长至80％融合时，换成培养液3培养24h，使细胞周期同步化；C.在37℃、5％CO2(v/v)及饱和湿度条件下，将采用上述医用脂肪乳诱导液诱导步骤B得到的细胞12‑72h，得到产品即肝细胞脂肪变性模型。