[发明专利]一种利用亲和双水相系统提高凝血因子Ⅷ及其类似物分离效率、纯度与生物比活性的方法

摘要

本发明公开了一种提高凝血因子VIII及其类似物分离效率、纯度与生物比活性的简单、快捷方法。此方法基于应用亲和双水相技术，即将特征亲水高分子化合物，优选聚乙二醇(PEG)，与磷酸盐、或葡聚糖、或其它第二组份在水溶液中形成稳定亲和双水相，其核心技术之一是：实现PEG与凝血因子VIII特异性亲和小肽配位体共价连接。凝血因子VIII优先地定位于连接了亲和小肽配位体的特征亲水高分子化合物相中，而来自细胞提取物的大部分蛋白(或称杂蛋白)倾向于移动至另一相。本发明通过改变目的蛋白或多肽在一相或另一相中的存在，从而得以高效和高纯度纯化所述蛋白或多肽。

主权项

一种提高凝血因子VIII及其类似物分离效率、纯度与生物比活性的简单、快捷方法。此方法基于应用亲和双水相技术，即将特征亲水高分子化合物，优选聚乙二醇(PEG)，与磷酸盐、或葡聚糖、或其它第二组份在水溶液中形成稳定亲和双水相，其核心技术之一是：实现PEG与凝血因子VIII特异性亲和小肽配位体共价连接。凝血因子VIII优先地定位于连接了亲和小肽配位体的特征亲水高分子化合物相中，而来自细胞提取物的大部分蛋白(或称杂蛋白)倾向于移动至另一相。经过一系列洗涤操作以去除余下的杂质后，通过添加对结合至特征亲水高分子化合物的凝血因子VIII具有竞争性亲和力或可破坏PEG‑凝血因子VIII亲和吸附的可溶性分子，反转蛋白质的定位，或曰反向萃取。本发明包括改变目的蛋白或多肽在一相或另一相中的存在，从而得以高效和高纯度纯化所述蛋白或多肽。本发明是关于一种提高凝血因子VIII及其类似物分离效率、纯度与生物比活性的一种具有成本效益的办法。本发明所涉及的方法与步骤，包括使用机械或化学方法将细胞破碎、与缓冲盐溶液混合、低速低温或常温离心、去除细胞破碎沉淀物、加入特征亲水高分子化合物，优选聚乙二醇(PEG)，及双水相成相成分、借助重力或离心力实现相分离并得到双水相、反复相分离，最后通过改变盐体系、盐浓度、pH值、或添加对结合至特征亲水高分子化合物的凝血因子VIII具有竞争性亲和力或可破坏、拮抗PEG‑凝血因子VIII亲和吸附的可溶性分子等措施反转蛋白质相定位的一系列步骤。