[发明专利]可线性化穿梭载体BmBacmid的构建方法无效
| 申请号： | 201210037290.8 | 申请日： | 2012-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN102559760A | 公开（公告）日： | 2012-07-11 |
| 发明（设计）人： | 陈健;陈琴;张耀洲;吕正兵;陈倩 | 申请（专利权）人： | 浙江理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N7/01 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种可线性化穿梭载体BmBacmid的构建方法，包括如下步骤：1)构建含两个AvrII位点的pBacAvrII2载体；2)构建含细菌人工染色体BAC的pBACAvrII2载体：设计一对两端含FseI位点的引物，从DH10Bac Bacmid上扩增细菌人工染色体BAC片段，插入到pBacAvrII2中；得到pBACAvrII2载体；3)可线性化穿梭载体BmBacmid的构建：以pBACAvrII2载体为模板，PCR扩增BAC的片段，然后将PCR产物和线性化的BmBacPAK共转染家蚕细胞，在家蚕细胞内通过同源重组产生重组病毒，从而获得可线性化穿梭载体BmBacmid。 | ||
| 搜索关键词： | 线性化 穿梭 载体 bmbacmid 构建 方法 | ||
【主权项】：
可线性化穿梭载体BmBacmid的构建方法，其特征是包括如下步骤：1)、构建pBacAvrII2载体：在pBacPAK8载体上引入限制性内切酶位点FseI和AvrII；从而构建成含两个AvrII位点的转移载体pBacAvrII2；2)、构建含细菌人工染色体BAC的pBACAvrII2载体：设计一对两端含FseI位点的引物，从DH10Bac Bacmid上扩增细菌人工染色体BAC片段，插入到pBacAvrII2中；得到pBACAvrII2载体；3)、家蚕杆状病毒表达载体‑‑‑‑‑可线性化穿梭载体BmBacmid的构建：以pBACAvrII2载体为模板，PCR扩增BAC的片段，所述BAC的片段含两个AvrII和FseI酶切位点、且片段两端为多角体基因侧翼序列，然后将PCR产物和线性化的BmBacPAK共转染家蚕细胞，在家蚕细胞内通过同源重组产生重组病毒，从而获得BmBacmid载体，所述BmBacmid载体为可线性化穿梭载体BmBacmid。
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