[发明专利]利用种子序列检测山羊组织或器官中microRNA靶基因的方法无效
| 申请号： | 201210038354.6 | 申请日： | 2012-02-13 |
| 公开（公告）号： | CN102643898A | 公开（公告）日： | 2012-08-22 |
| 发明（设计）人： | 付绍印;赵德超;张文广;李金泉 | 申请（专利权）人： | 内蒙古农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 010018 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用种子序列检测山羊组织或器官中microRNA靶基因的分子方法。具体而言，提供了种子序列介导的可控遗传操作，用于在基因表达检测中筛选与特定microRNA相关的靶基因。在设定上游种子序列的互补序列和下游锚定序列的基础上添加特殊接头，通过反转录和特殊二步PCR将microRNA的靶基因扩增；扩增后的microRNA靶基因在聚丙烯酰胺凝胶电泳中检测其片段大小和表达丰度，用于筛选在不同生理状态或实验条件下特异表达的基因；特定的靶基因序列通过DNA回收和测序方法得到。此法可用于评估microRNA调节的基因或遗传途径，也可用表达谱来评估基因表达特征，在系统生物学研究中具有重要价值。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 种子 序列 检测 山羊 组织 器官 microrna 基因 方法 | ||
【主权项】：
利用种子序列检测山羊组织或器官中microRNA靶基因的分子方法，其特征在于包括以下步骤：(1)合成反转录引物；(2)合成包含不同接头序列的上、下游PCR引物；(3)消化去除基因组污染，对样品总RNA的提取；(4)采用步骤(1)的反转录引物将样品RNA反转录获得cDNA；(5)采用步骤(2)上下游PCR引物，两步PCR法获得某一microRNA的靶基因序列；(6)PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其片段大小和表达丰度；(7)切取靶基因条带，重扩增、回收、克隆、测序。
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