[发明专利]一种利用极低频交变磁场种子培养转化新科斯糖的方法

摘要

本发明公开了一种利用极低频交变磁场种子培养高效转化新科斯糖的方法，属于生物工程技术领域与电磁学领域的结合。以法夫酵母为出发菌株，在一定频率和强度的极低频交变磁场作用下，法夫酵母经振荡器摇瓶发酵制备种子培养基、菌体细胞的扩大培养，静息细胞的制备，全细胞的生物转化来产新科斯糖。菌体细胞产糖的最适工艺条件为：种子培养发酵液中心磁场3000Gs~5000Gs，交变磁场频率10Hz，全细胞生物转化制备新科斯糖时的细胞浓度30-90g/L，蔗糖浓度200-400g/L，反应温度20-30℃，反应时间4-8h，所用细胞菌龄为32-48h。在此工艺条件下新科斯糖的转化率可达65%以上，转化糖液直接浓缩干燥即可达P55级。

主权项

一种利用极低频交变磁场种子培养转化新科斯糖的方法，其特征在于如下步骤为：极低频交变磁场下的种子培养、细胞增殖培养、静息细胞的制备、新科斯糖的全细胞生物转化生产工艺；（1）种子培养：将法夫酵母（Xanthophyllomyces dendrorhous）269接种于种子培养基中，于20℃，磁场交变频率10Hz，中心磁场为3000Gs~5000Gs的振荡器摇瓶中，180‑250r/min振荡培养40‑48h，制得种子液；种子培养基：蔗糖35g/L，蛋白胨8g/L，酵母膏3g/L，用去离子水配制；（2）细胞增殖培养：将种子液接种于发酵培养基中，接种量5%‑10%，于18‑24℃摇床200‑250r/min条件下大量生产法夫酵母细胞；发酵培养基：蔗糖50g/L，蛋白胨6g/L，酵母膏3g/L，用去离子水配制；（3）静息细胞的制备：通过离心法收集上述细胞增殖培养所产微生物，用柠檬酸磷酸缓冲液洗涤两遍，然后悬浮于同样的缓冲液中得静息细胞；（4）新科斯糖的全细胞生物转化生产工艺：将静息细胞离心并收集湿菌体，经称重后直接加入蔗糖溶液中转化生产新科斯糖，转化条件为：反应体系为蔗糖溶液，细胞加入量30‑90g/L，蔗糖浓度200‑400g/L，反应温度为20‑30℃，反应时间4‑8h，细胞菌龄32‑48h。