[发明专利]东方百合种球脱毒方法

摘要

本发明提供了一种东方百合种球脱毒方法，具体通过以下步骤完成：A、外植体生长点的剥取，B、热处理脱毒，C、外植体清洗消毒，D、生长点采集诱导培养，E、脱毒培养，F、病毒检测。该发明克服了现有技术存在的不足，综合运用热处理脱毒、茎尖培养脱毒和愈伤组织脱毒的脱毒方法，解决了单独使用一种方法存在的不足，该方法能有效减少病毒交叉感染的机会，脱毒率高，成活率高，能有效缩短种球培养周期。

主权项

东方百合种球脱毒方法，其特征在于，包括以下步骤：A、外植体生长点的剥取：选优质种球，用浓度为20～40%的多菌灵600倍溶液浸泡30分钟；将消过毒的泥炭用水拌湿，使其含水量为45～55%，备用；再将多菌灵浸泡后的种球种在拌湿的基质中，每箱下种20～25个种球，浇定根水，然后将泡过种球的多菌灵溶液洒在表面；按切花种植方法正常管理，保持基质45～55%的水分；在温度为21～23℃，湿度为70～80%，光照强度1500～2000Lx，光照时间8～12h/d的条件下，经过5～7天后，芽长到5～6cm时进行热处理脱毒；B、热处理脱毒：将温度控制在35～38℃之间，湿度为70～85%，光照强度1500Lx，光照时间8～12h/d的环境条件下，经过7～15天培养，芽长高并绽开成莲座状；C、外植体清洗消毒：①用清水冲洗后，剥去部分叶片，用中性肥皂水洗5分钟，用纱布包好，清水冲洗12小时；②用浓度为0.1%的升汞浸泡8分钟；③再用浓度为75%的酒精浸泡8～15秒；④ 吐温80无菌水浸泡2～3分钟；⑤再用无菌水洗5～7遍至无泡沫；D、生长点采集诱导培养：采集长度为0.3～0.5 mm的百合茎尖生长点接种到诱导培养基中培养，温度21～23℃，光照强度1500～3000Lx，光照时间8～12h/d，培养40～60天后,生长点膨大成直径2～3cm的叶丛；E、脱毒培养：将诱导出的叶丛切成0.5cm小块，接种于脱毒培养基中，在温度为21～23℃，光照时间为8～12h/d，光照强度为2000～3000Lx的环境条件下，经过40～60天培养，形成带球的瓶苗；F、病毒检测：将瓶苗采用RT‑PCR检测法检测，经检测确认无任何病虫害现象，并不带百合无症病毒、黄瓜花叶病毒和百合斑驳病毒等病毒，即为百合脱毒种苗。