[发明专利]一种幼胚拯救获得东方百合远缘杂种的方法

摘要

本发明提供了一种幼胚拯救获得东方百合远缘杂种的方法，具体通过以下步骤完成：A、果实消毒，B、剥胚，C、增殖培养，D、成球培养，E、低温处理。该发明克服了现有技术存在的不足，使大量远缘杂交胚继续发育成正常种子，有效避免了远缘杂种胚早衰，同时获得大量的远缘杂交后代，实现百合属种间远缘杂交。该方法能够提高东方百合杂交后代的杂种成活率，缩短育种周期。

主权项

一种幼胚拯救获得东方百合远缘杂种的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、果实消毒：将授粉后30～60天的未完全发育子房切割下来，在2～7℃温度条件下，存放24～72小时后取出，用浓度为75%的酒精对其表面擦拭2～3次后带到超净工作台；B、剥胚：用分析纯酒精浸泡25～35秒，放在酒精灯上烧10～30秒，然后选取膨大部位，将子房沿着心皮线切开，选出有胚种子剥离出胚，接入1/2MS+糖60g/L+琼脂5.5g/L，PH 5.8培养基中培养15～45天后幼胚萌发率达100%；C、增殖培养：将萌发的幼胚接种到MS+KT 5mg/L+NAA 0.2mg/L+CPPU 4mg/L+糖40 g/L +BA 0.3mg/L+琼脂6.5～7.0g/L，PH 5.8，在温度22～25℃，光照强度1500～2000Lx，光照8～12h/d的环境条件下进行幼苗小鳞茎培养，20～30天转接一次；D、成球培养：经过步骤C的处理，当增殖数量达到目标数量时，将其分离成单株，切除叶片后接种到MS+ NAA0.1 mg/L +糖60g/L+琼脂6.5g/L+活性炭2～5g/L，PH 5.8的培养基上，20～30天即可生根，大部分小球膨大为直径0.5～1.0cm籽球；E、低温处理：将步骤D的籽球放入冷库中，在温度为3～4℃的条件下，冷藏处理30～40天后打破休眠，即可移栽，测得成活率达95～98%。