[发明专利]苏云金芽孢杆菌发酵液对高羊茅脯氨酸和丙二醛的调节方法

摘要

本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌发酵液对高羊茅脯氨酸和丙二醛的调节方法，它是在直径为6.5cm的培养皿中加入30g草坪土壤，分别向土中加入150μl不同浓度的含有苏云金芽孢杆菌的堆肥微生物发酵滤液，对照组加入无菌液体培养基，每个培养皿中均匀的撒入50粒饱满的高羊茅种子，室温种植，待种子萌发后测定各项指标。实验结果表明：苏云金芽孢杆菌发酵滤液处理的草坪植物叶片中丙二醛含量及草坪植物体内积累的游离脯氨酸含量均明显低于对照，其中脯氨酸含量与对照相比降低了38.78%，对照组草坪植物的丙二醛含量是用苏云金芽孢杆菌发酵滤液处理组的4.10倍。

主权项

一种堆肥发酵液对高羊茅脯氨酸和丙二醛的调节方法，其特征在于按如下的步骤进行：(1)苏云金芽孢杆菌的分离：1）将新鲜堆肥样品称取10g，放入加有20粒玻璃珠的90ml无菌水三角瓶中，振荡，使样品中的微生物充分且均匀分布于液体中，用移液枪在三角瓶中取lml母液，加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，此为l0‑1浓度的稀释溶液，按此方法分别稀释成l0‑2、l0‑3、l0‑4、l0‑5、l0‑6几种浓度的堆肥稀释液；分别用移液枪吸取0.1毫升浓度为l0‑2、l0‑3、l0‑4、l0‑5、l0‑6稀释液，注入到牛肉膏蛋白胨固体平板培养基上，每一稀释度重复三次，无菌水为空白对照；用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整牛肉膏蛋白胨固体培养基上，使微生物均匀分布，将含有牛肉膏蛋白胨固体培养基的平板倒置于37℃恒温培养箱中培养1天；2）苏云金芽孢杆菌发酵液的制备：A.将分离出的苏云金芽孢杆菌菌种纯化培养2代；然后接入装有50mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的250 mL三角瓶中，180 r/min37℃培养，选用600nm波长进行比浊测定，以菌悬液的OD值为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制微生物的生长曲线，根据生长曲线获得苏云金芽孢杆菌生长至稳定期的时间；其中的纯化培养2代培养指的是：用接菌环直接挑起待纯化的菌落，接种到事先准备好的高氏一号平板固体培养基中，在平板上自左向右轻轻划线，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱中培养1天，此过程为纯化一代，从纯化一代的菌种中挑取菌落再重复此过程为纯化二代；B.取纯化苏云金芽孢杆菌菌种，接入装有50mL高氏一号液体培养基的250 mL三角瓶中，180 r/min37℃培养8～12 h至稳定期，取稳定期的菌种采用显微镜直接计数法计算每mL菌液中的活菌数，将稳定期的菌液进行抽滤，抽滤后将菌液通过孔径为0.22um的微孔滤膜，获得的过滤液则为微生物发酵后的过滤液；3）稀释苏云金芽孢杆菌发酵液：取一部分过滤液分别稀释至4倍滤液和8倍滤液，备用；4）发酵滤液对高羊茅脯氨酸和丙二醛的调节：在直径为6.5cm的培养皿中加入30g草坪土壤，分别向土壤中加入150μl 不同浓度的苏云金芽孢杆菌发酵滤液，然后每个培养皿中均匀的撒入50粒饱满的高羊茅种子，室温种植，实验时室温平均为18℃，湿度平均为40%，待种子萌发后测定各项萌发指标。