[发明专利]采用苏云金芽孢杆菌发酵液提高草坪植物抗盐性的方法

摘要

本发明公开了一种采用苏云金芽孢杆菌提高草坪植物抗盐性方法，它是在直径为7cm的一次性塑料杯中加入200g不同浓度的盐碱土，在每个杯中，分别播种黑麦草、高羊茅草种0.5g，实验为3次重复，待草坪植物生长约5cm时，分别向土中加入1ml各种菌剂，对照组加入无菌液体培养基，将塑料杯移至实验地深埋于土中，以保持植物生长环境与试验地土壤环境一致，每天定量给水，保证各个处理间一致。待其生长2个月后测定各项指标。出苗稳定后（10d）移植到田间深埋于土中，以保持植物生长环境与试验地土壤环境一致。实验结果表明：加入苏云金芽孢杆菌菌剂后在一定程度上缓解了草坪植物受胁迫的程度，促进了草坪植物的生长。

主权项

一种采用苏云金芽孢杆菌发酵液提高草坪植物抗盐性的方法，其特征在于按如下的步骤进行：(1)苏云金芽孢杆菌的分离：1）将新鲜堆肥样品称取10g，放入加有20粒玻璃珠的90ml无菌水三角瓶中，振荡，使样品中的微生物充分且均匀分布于液体中，用移液枪在三角瓶中取lml母液，加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，此为l0‑1浓度的稀释溶液，按此方法分别稀释成l0‑2、l0‑3、l0‑4、l0‑5、l0‑6几种浓度的堆肥稀释液；分别用移液枪吸取0.1毫升浓度为l0‑2、l0‑3、l0‑4、l0‑5、l0‑6稀释液，注入到牛肉膏蛋白胨固体平板培养基上，每一稀释度重复三次，无菌水为空白对照；用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整牛肉膏蛋白胨固体培养基上，使微生物均匀分布，将含有牛肉膏蛋白胨固体培养基的平板倒置于37℃恒温培养箱中培养1天；2）苏云金芽孢杆菌发酵液的制备：A.将分离出的苏云金芽孢杆菌菌种纯化培养2代；然后接入装有50mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的250 mL三角瓶中，180 r/min37℃培养，选用600nm波长进行比浊测定，以菌悬液的OD值为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制微生物的生长曲线，根据生长曲线获得苏云金芽孢杆菌生长至稳定期的时间；B.取纯化苏云金芽孢杆菌菌种，接入装有50mL高氏一号液体培养基的250 mL三角瓶中，180 r/min37℃培养8～12 h至稳定期，取稳定期的菌种采用显微镜直接计数法计算每mL菌液中的活菌数，将稳定期的菌液进行抽滤，抽滤后将菌液通过孔径为0.22um的微孔滤膜，获得的过滤液则为微生物发酵后的过滤液；3）稀释苏云金芽孢杆菌发酵液：取一部分过滤液分别稀释至4倍滤液和8倍滤液，备用；4）采用苏云金芽孢杆菌提高草坪植物抗盐性：实验采用盆栽方法，在直径为7cm的一次性塑料杯中加入200g，0.4‑0.8%浓度的盐碱土，在每个杯中，分别播种黑麦草、高羊茅草种0.5g，实验为3次重复，待草坪植物生长约5cm时，分别向土中加入1ml发酵液，对照组加入无菌液体培养基，将塑料杯移至实验地深埋于土中，以保持植物生长环境与试验地土壤环境一致，每天定量给水，保证各个处理间一致；待其生长2个月后测定各项指标；出苗稳定后（10 d）移植到田间深埋于土中，以保持植物生长环境与试验地土壤环境一致；其中的纯化培养2代培养指的是：用接菌环直接挑起待纯化的菌落，接种到事先准备好的高氏一号平板固体培养基中，在平板上自左向右轻轻划线，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱中培养1天，此过程为纯化一代，从纯化一代的菌种中挑取菌落再重复此过程为纯化二代。