[发明专利]用于荧光定量检测的一管式磁珠法病毒核酸的提取方法

摘要

本发明涉及一种用于荧光定量检测的一管式磁珠法病毒核酸的提取方法，属于生物中核酸应用技术领域。首先配制裂解液，将裂解液和磁珠加入到联排管中，将病毒核酸样本加入到该联排管中，充分混匀，使病毒核酸被磁珠充分吸附；再将磁珠混合液放到磁力架上，静止数秒，使磁珠与溶液分开；再进行去蛋白漂洗和去盐漂洗，室温晾干。本发明方法简单、快速，不易引起污染，而且灵敏度高。使用本发明方法提取效率高、核酸纯度高、检测重复性好、对扩增试剂的兼容性好，不但节约了生产成本而且还提高了操作的准确性，极大的方便了临床诊断以及法医鉴定等方面的工作。

主权项

一种用于荧光定量检测的一管式磁珠法病毒核酸的提取方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将10～50微升待测样本加入到联排管中，联排管中含有：体积为待测样本体积3倍的病毒裂解液以及10微升磁珠，混匀，使核酸释放，磁珠与核酸结合，得到核酸和磁珠的混合物，其中所述的病毒裂解液的成分为：摩尔浓度为5～6摩尔/升的异硫氰酸胍、摩尔浓度为50～100毫摩尔/升的三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液、摩尔浓度为1～10毫摩尔/升的乙二胺四乙酸二钠、摩尔浓度为50～65毫摩尔/升的二硫苏糖醇、25～30微克/毫升的糖原、体积比为1％的聚乙二醇辛基苯基醚、体积比为2％的非离子表明活性剂‑NP40、体积比为0.5％的吐温80；(2)将上述含有核酸和磁珠混合物的联排管置于磁力架上，通过磁力作用将吸附有核酸的磁性颗粒与溶液分开，弃掉溶液，取下联排管；(3)向上述步骤(2)的联排管中加入100微升去蛋白缓冲液，充分混匀，在磁场作用下使磁性颗粒与液体分开，弃掉溶液，取下联排管；(4)向上述步骤(3)的联排管中加入100微升去盐漂洗液，充分混匀，在磁场作用下使磁性颗粒与液体分开，弃掉溶液，取下联排管；(5)将上述步骤(4)的联排管置于室温，晾干2分钟，充分挥发管中残余液体。