[发明专利]一种简易、快速分离好氧反硝化芽孢杆菌的方法

摘要

本发明公开了一种分离好氧反硝化芽孢杆菌的方法，对目标物取样进行间歇增氧选择性富集培养，然后对富集培养物进行水浴后，稀释涂布梯度NO2--N/NO3—N平板，以利用NO2--N/NO3—N与相应的显色剂显色的特点，从喷涂显色液后的平板中高NO2--N/NO3—N浓度区域选取菌落周边无显色或显色浅淡菌落，快速筛出好氧反硝化菌；通过划线法得到纯培养菌株，接着对纯培养物进行染色镜检，以初筛选出具有好氧反硝化能力的芽孢杆菌；最后根据纯菌株在不同NO2--N/NO3—N浓度的富集培养基的生长情况以确定适宜的NO2--N/NO3—N浓度，设计好氧反硝化降解试验复筛出高效好氧反硝化能力的菌株。本发明方法具有快速分离、提纯出高效好氧反硝化的芽孢杆菌的特点，为生物脱氮技术提供了一个新的途径。

主权项

一种简易、快速分离筛选好氧反硝化芽孢杆菌的方法，其特征在于：选择如土壤、池塘水样、 泥样或活性污泥等目标物接种于含有NO2‑‑N/NO3—N的富集培养基中，进行间歇增氧富集培养；然后移取适量富集培养物在75‑80℃水浴杀除杂菌后，稀释涂布于含NO2‑‑N/NO3—N梯度平板培养；然后对培养后的平板进行喷涂NO2‑‑N/NO3—N显色液，在平板高浓度NO2‑‑N/NO3—N区域挑挑取菌落周边无显色或显色浅淡菌落，继续用划线法获得纯培养物，对纯培养物革兰氏染色镜检，以内生芽孢杆菌的作为初筛菌株；接着利用纯培养物菌体在不同NO2‑‑N/NO3—N浓度的培养基中，恒温间歇增氧培养，测定其OD600nm吸光度值，以定量的确定芽孢杆菌所适应的NO2‑‑N/NO3—N浓度范围；在确定的适中的NO2‑‑N/NO3—N浓度下，用含有NO2‑‑N/NO3—N的液体富集培养基，分别培养不同好氧反硝化芽孢杆菌，通过测定液体富集培养基中NO2‑‑N/NO3—N含量，以求解其去除率，复筛出好氧反硝氧能力强劲的芽孢杆菌。