[发明专利]一种对虾病毒感染模型的建立方法有效
| 申请号： | 201210062792.6 | 申请日： | 2012-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN102613112A | 公开（公告）日： | 2012-08-01 |
| 发明（设计）人： | 周俊芳;房文红;万夕和 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所 |
| 主分类号： | A01K61/00 | 分类号： | A01K61/00 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 200090 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种对虾病毒感染模型的建立方法，包括：(1)WSSV病毒分离和保存液的制备；(2)不同浓度WSSV保存液感染凡纳滨对虾；(3)对虾累积死亡率观察法确定该次RNA干扰研究的对虾病毒感染量。通过本发明的方法建立的对虾病毒感染模型重现性好，RNA干扰研究结果可信度高；操作简便，判断标准明晰，不仅适用于RNA干扰的抗病毒研究，也可用于将来RNA干扰制剂在水产实践中的推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 对虾 病毒感染 模型 建立 方法 | ||
【主权项】：
一种对虾病毒感染模型的建立方法，包括：(1)将人工接种WSSV后发病死亡的凡纳滨对虾去除附肢、头胸甲和肝胰腺并称重，与0.01M PBS按质量体积比1∶10稀释，玻璃匀浆器匀浆，匀浆液于4℃离心20min，上清液依次用滤纸和0.45μm滤膜过滤除菌并分装成病毒保存液，‑80℃冻存备用；(2)体重7～9g、PCR检测阴性的健康凡纳滨对虾在室内池塘暂养1周后，随机分组，每组14只，分别暂养于玻纤桶中；每次RNA干扰实验前将病毒保存液稀释成10‑(n‑2)、10‑(n‑1)、10‑n、10‑(n+1)、10‑(n+2)共5个浓度的感染液，用胰岛素注射器分别于凡纳滨对虾第四腹节处肌肉注射，每尾50μL，对照组同法注射0.01M PBS；对虾养殖水温控制在27～28℃，每天换水1/2，24h持续充气；每天观察四次，捡出死亡和濒死对虾，记录死亡数，持续观察8d；(3)根据判定标准，进行RNA干扰实验时，病毒感染液浓度为病毒保存液作10‑n倍稀释，既而确定对虾的病毒感染量，建立病毒感染模型。
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