[发明专利]制备和构建抗各种已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2β抗体库的方法

摘要

本发明是对已公开发明专利(申请号201110103966.4)“制备和构建抗各种呼吸道病毒感染的重大创新性Ab2β抗体库的方法”，更具创造性的全方位补充。本发明说明书对外表明，作为世界首创项目具有完全的可行性和重大用途，否定本发明即否定现代免疫学和相应大自然规律。而且通过权利要求书囊括任何衍生途径的发明专利。本发明五个主要目标：1.实验方案开始，半年内就会有本发明关键产品，立即向全世界各大国申请发明专利，保护主要技术控制世界市场。2.同时伴随试验附加产品：筛选特异性抗人肺肿瘤细胞的抗体。3.一年半时间内构建多个不同用途的Ab2β抗体库，用于筛选抗各种人类呼吸道病毒特异性中和抗体。4.为工程抗体(三种特异性免疫球蛋白)产业化之路打基础。5.其它重要用途。本发明罕见的将如此众多的知识点、难点、技术点、发现和创造点浑然成一体，需辩证全面透彻思维方可理解。

主权项

一种制备和构建抗各种已知和未知呼吸道病毒感染的Ab2β抗体库的方法，其特征在于整个实验方案：包括第一阶段和第二阶段两个主要实验步骤。第一阶段主要实验步骤：(1).通过四种不同试验途径制备全方位抗人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位抗体(Ab1抗体)：一方面①.应用不同来源保有天然正确空间结构的人呼吸道上皮细胞和相应肿瘤细胞(包括相应永生化细胞)，分别免疫大量不同品系(注：包括杂交和野生)的兔子和鼠，从中分别提取兔子和鼠的抗人血清和其纯化的总抗体。然后应用保有天然正确空间结构的人呼吸道上皮细胞分别与这些抗人血清和其纯化的总抗体相互作用，接着以人呼吸道上皮细胞吸附其中抗体，即抗人呼吸道上皮细胞抗体，并采用常规免疫学实验技术或新方法提取和纯化这些抗体，本发明把这些专一抗人呼吸道上皮细胞的抗体称Ab1抗体。②.制备大量不同品系(注：包括杂交和野生)未经免疫的兔子和鼠以及羊等动物血清和从这些动物血清中提取纯化的总抗体。然后应用保有天然正确空间结构的人呼吸道上皮细胞分别与这些未经免疫的兔子和鼠以及羊等动物血清和其纯化的总抗体相互作用，接着以人呼吸道上皮细胞吸附其中抗体，即抗人呼吸道上皮细胞抗体，并采用常规免疫学实验技术或新方法提取和纯化这些抗体，本发明把这些专一抗人呼吸道上皮细胞的抗体称Ab1抗体。③.应用常规免疫学试验技术，从不同品系牛和羊乳汁中提取纯化总抗体。然后应用保有天然正确空间结构的人呼吸道上皮细胞分别与这些从不同品系牛和羊乳汁中提取纯化的总抗体相互作用，接着以人呼吸道上皮细胞吸附其中抗体，即抗人呼吸道上皮细胞抗体，并采用常规免疫学实验技术或新方法提取和纯化这些抗体，本发明把这些专一抗人呼吸道上皮细胞的抗体称Ab1抗体。④由于这是一条十分特殊的试验途径因此单独阐述：即通过说明书2.1.2途径可得到万人体内全部不同克隆的抗体。首先应用保有天然正确空间结构的人呼吸道上皮细胞与上述商品化的全部人免疫球蛋白相互作用，并通过常规免疫学实验技术，提取并纯化吸附在人呼吸道上皮细胞的低亲和性和多反应性的天然自身抗体(NAA)，即少量的具有天然免疫耐受性质的Ab1抗体。同时全部回收(收集并保留)那些 不与上皮细胞相结合的全部人免疫球蛋白。然后再用相应肿瘤细胞与那些不与上皮细胞结合的全部人免疫球蛋白相互作用，从中筛选特异性抗癌抗体。并在吸附特异性抗癌抗体后，最后千万注意再次全部回收和储存那些不与肿瘤细胞相结合的全部人免疫球蛋白以备制备本发明所需的Ab2β抗体。本发明通过上述四种途径‑‑‑制备全方位抗人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位的Ab1抗体(本发明称原始Ab1抗体，借以区别第二阶段的人工“Ab1抗体库”)。。另一方面上述试验衍生的附加产品‑‑‑‑‑特异性抗相应人肺肿瘤细胞Ab1抗癌抗体的获得。特别重点指出：本发明在该阶段试验中存在着毫不费力的附加产品(抗癌领域方面)‑‑‑‑‑即应用不同来源保有天然正确空间结构的人呼吸道上皮细胞完全彻底吸附上述四种途径制备Ab1抗体的试验后，再应用相应人肺肿瘤细胞分别与全部回收(收集并保留)没有结合上皮细胞后所剩下的其它全部抗体相互作用。，接着以相应人肺肿瘤细胞吸附其中抗体，即抗人肺肿瘤细胞抗体，并采用常规免疫学实验技术或新方法提取和纯化这些抗体，本发明把这些专一抗人肺肿瘤细胞抗体，称特异性Ab1抗癌抗体。有充分理论依据说明：本发明已经是尽可能最大限度集中人和动物众群体免疫系统的综合力量，并以求获得最大程度免疫识别广度和深度的优势效应，即众多不同的“自我”与“非我”免疫识别体系，以此克服个体免疫识别盲区(如有充分理论依据说明鼠源单克隆抗体免疫识别能力十分有限，而且由于遗传因素影响每一个体淋巴细胞库的库容量都是既有限度又有差异，另外个体免疫系统胚胎发育期因先天免疫耐受造成T细胞库和B细胞库漏洞……等众多原因)，用以识别人呼吸道上皮细胞与相应肿瘤细胞之间的微细差异(注：这本身就是辩证思维相对论指导下事物两面性和整体与局部相互作用的大局观念)。因此通过本阶段该方法获得的抗癌抗体比之目前任何方法获得的抗癌抗体在精准性识别肿瘤细胞方面都会更加可靠和更具有可行性。(注：一般规律是应用同一个体具有共同起源的人呼吸道上皮细胞和相应人肿瘤细胞从事上述试验的，这种试验准确度高。如同一个体肺癌手术切除术后，分离被切除肿瘤组织中的新鲜正常细胞和新鲜肿瘤细胞)(2).全方位模拟人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位抗体(Ab2β抗体)的制备：一方面①.首先通过以下三种不同途径，分别获得大量不同来源的不同人群的不同个体和不同种系的不同动物(注：包括杂交和野生)以及其它不同来源的总抗体。第一途径：应用常规免疫学实验技术，分别提取纯化大量不同人血清和不同品系(注：包括杂交和野生)兔子、鼠、羊等动物血清中的总抗体。第二途径：应用常规免疫学实验技术，分别从牛和羊或人乳汁中提取纯化总抗体。第三途径：购买正规市场各种不同来源的商品化人体免疫球蛋白，即通过(1)……④……途径全部回收(收集并储存)那些不与人呼吸道上皮细胞和相应肿瘤细胞相结合的所有剩下的全部人免疫球蛋白，这才是本发明制备人源性Ab2β抗体所需总抗体的最佳途径。本发明通过上述三种途径可分别获得大量不同来源未经免疫的人和动物的总抗体(注：内含潜在的本发明所需的“Ab2β抗体”)。②专一筛选结合Ab1抗体抗原结合位点的Ab2β抗体：首先通过本发明十分简单的独创性免疫试验技术，分别巧妙处理第一阶段(2)……①……通过上述三种途径获得大量不同来源未经免疫的人和动物的总抗体(注：内含潜在的本发明所需的Ab2β抗体)与第一阶段(1)……制备的全方位抗人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位的Ab1抗体，关键在于解决两者之间相互作用关系问题。即通过本发明独创性免疫试验技术，分别从第一阶段(2)……①……经三种途径获得的大量不同来源未经免疫的人和动物总抗体中，完全彻底清除掉与全部Ab1抗体本身的抗原结合部位不能结合的任何无关的抗体，辩证思维就是指完全彻底清除掉那些专门与Ab1抗体(非抗原结合部位)本身其它表位相结合的抗体。经过本发明这种独创性特殊筛选技术和过程，唯一目的是全部回收(收集和储存)其它与本发明相关的抗体(注：内含潜在的本发明所需的Ab2β抗体)。然后应用常规免疫学实验技术如免疫亲和纯化技术：第一步，将纯化的Ab1抗体与固相基质共价连接，制备Ab1抗体亲和层析柱。第二步，在(2)……①和②……试验过程，即已经完全彻底清除掉与Ab1抗体(非抗原结合部位)的本身其它表位相结合的无关抗体后，把全部回收(收集和储存)的其它与本发明相关的总抗体，分别与Ab1抗体亲和层析柱相互作用，唯一目标是特异性筛选结合到Ab1抗体本身的抗原结合部位的抗体，即本发明所需的Ab2β抗体。第三步，从层析柱上洗脱Ab2β抗体。如此经过免疫亲和纯化技术，分别提取纯化来自人源和动物源的 不同的Ab2β抗体。另一方面上述试验衍生的附加产品‑‑‑‑‑‑‑模拟人相应肺肿瘤细胞膜表面特有抗原表位抗体(Ab2β抗体)的获得，整个试验过程和应用技术完全同第一阶段(2).全方位模拟人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位抗体(Ab2β抗体)的制备试验过程和应用技术，因此不再重复阐述。制备的模拟人相应肺肿瘤细胞膜表面特有抗原表位的Ab2β抗体，同样可通过下面第二阶段主要实验步骤的整个试验过程和应用技术，获得“Ab1抗癌抗体”产生细胞。并可通过转基因动物或通过细胞工程抗体技术和基因工程抗体技术制备工程抗癌抗体，最终走向工程抗癌抗体产业化之路。由于本发明目标和实验方案时间有限，故对抗癌抗体的制备在此简单陈述，并在第二阶段主要实验步骤不再阐述这种附加产品。(3)竞争抑制试验应用各种常规免疫学实验技术：根据竞争抑制试验，观察Ab2β抗体竞争抑制人呼吸道上皮细胞与Ab1抗体结合的能力，特别是能否全方位阻断人呼吸道上皮细胞与Ab1抗体的结合能力(同时设置人呼吸道上皮细胞与Ab1抗体结合的对照组)，以此判断本发明全方位模拟人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位的Ab2β抗体是否还存在“克隆漏洞”，本发明可完全通过简单的特异性试验弥补这种“克隆漏洞”。(4).检测Ab2β抗体与引起普通感冒的各种病毒和流感疫苗相互作用经过(2).全方位模拟人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位抗体(Ab2β抗体)的制备：过程，获得的全部Ab2β抗体，其实质就是一个简单的、不同的、初级的Ab2β抗体库。可以肯定此阶段尽管抗体库中每一单个克隆的抗体数量不会很多，但足以应对试验所需。本发明从安全角度出发，通过常规免疫学实验技术，检测Ab2β抗体与引起普通感冒的各种病毒和流感减毒活疫苗以及灭活疫苗相互作用。即通过不同技术手段检测Ab2β抗体与病毒和疫苗特异性结合的功能和效果。确证试验成功的最重要标志是：“Ab2β抗体库”与各种引发普通感冒的病毒和各种流感特定疫苗特异性结合的范围越广说明成功率越高(设置巧妙的试验对照组)，同时说明本发明“Ab2β抗体库”构建越完善。如果与上述病毒和疫苗特异 性结合的成功率达到百分之百，则意味着本发明“Ab2β抗体库”与未知和变异的致命性呼吸道病毒特异性结合的成功率也会极高。当然本发明“Ab2β抗体库”会进.一步完善。(5).Ab2β抗体与引起普通感冒的特定病毒中和试验如果针对某一特定病毒的特异性Ab2β抗体数量足够多的话，或者通过“追踪溯源”再次提取纯化该抗体，以便进行相应病毒中和试验。(6).确证试验证实本发明筛选到特异性抗病毒抗体，表明第一阶段(时间3‑6个月)试验成功结束。(7)预期产品：①制备具有不同功能和用途的全部原始Ab1抗体和相对应的全部原始Ab2β抗体。②本实验方案可毫不费力的极可能同时获得抗相应人肺肿瘤细胞的特异性抗癌抗体。(8).立即向世界各大国申请发明专利，在全世界控制实验方法和主要技术及场......第二阶段主要实验步骤：(1).制备和构建具有不同特殊功能和用途的“Ab1抗体库”：①.专一筛选能够结合Ab2β抗体本身抗原结合位点的B细胞：第一步试验：首先应用常规免疫学实验技术，分别提取纯化大量不同品系(注：包括杂交和野生)兔子、鼠、羊等动物的B细胞‑‑‑‑‑‑‑主要是未经过免疫的B细胞和第一阶段经过多次免疫后纯化并储存的兔子及鼠的B细胞，其中包括不同器官组织来源及不同途径来源的B细胞。第二步试验：通过本发明十分简单的独创性免疫试验技术，分别巧妙处理上述第一步试验获得的兔子、鼠、羊等动物的B细胞和第一阶段获得的全部Ab2β抗体，关键在于解决B细胞和Ab2β抗体两者之间相互作用关系问题。即通过本发明独创性免疫试验技术，从这些B细胞中完全彻底清除掉与全部Ab2β抗体本身的抗原结合部位不能结合的任何无关的B细胞，辩证思维就是指完全彻底清除掉那些专门与Ab2β抗体(非抗原结合部位)本身其它表位相结合的B细胞。经过本发明这种独创性特殊筛选技术和过程，唯一目的是全部回收(收集和保留)所有剩下的其它与本发明相关的B细胞(注：内含潜在的本发明所需的Ab1抗体产生细 胞)。第三步试验：即将第二步试验……全部回收(收集和保留)所有剩下的其它与本发明相关的B细胞并和全部Ab2β抗体分别分类进行相互作用，再通过流式细胞术(FCM)或结合免疫磁性微珠技术，可更多更快的筛选出专一结合Ab2β抗体本身的抗原结合部位的特异性B细胞，即本发明所需的Ab1抗体产生细胞。②.制备和构建具有不同特殊功能和用途的“Ab1抗体库”的方法和技术：首先将能够与Ab2β抗体本身的抗原结合部位特异性结合的B细胞，进行体外培养并在不同刺激条件下，在特定的不同时间内，通过两条途径：第一途径，将体外培养的B细胞(增值为目的)，通过构建噬菌体抗体库技术的两种不同方式：其一为主要方式，即B细胞内PCR(In‑CellPCR)装配技术‑‑噬菌体抗体库技术，以保证抗体的轻重链配对为体内原始配对的前提下，制备噬菌体Ab1抗体(注：本发明不排除伴随细胞内PCR(In‑CellPCR)技术‑‑噬菌体抗体库技术的不断进步，解决经多次免疫产生的千差万别不同克隆的记忆性B细胞，最重要“通用引物”设计的困难问题，制备轻重链配对为体内原始配对的噬菌体Ab1抗体)。其二，即通常的构建噬菌体抗体库技术，，尽管这种方式获得的抗体基因是体外的随机组合。但由于抗体和抗原结合的特异性常主要由VH决定，所以本发明全部特异性B细胞(Ab1抗体产生细胞)可在不改变特异性的情况下，使其每一个特异性的VH与本发明特异性B细胞不同的VL进行组合(链替换)，产生特异性相同而亲和力不同的Ab1抗体(注：不排除某些VH与VL因空间结构互补性差和稳定性差等原因导致配对失败)。因此本发明可在不改变每一个B细胞克隆特异性的情况下找到VH‑‑‑VL最佳配对，反而更可能筛选到高亲和力的Ab1抗体。或许由于类似免疫抗体库的原因，但本发明比免疫抗体库更具优越性和保障性，即全部由特异性B细胞克隆组成，如果数量足够大而且VH‑‑‑VL互补性强空间结构十分稳定，这会使原始抗体轻链和重链配对极易被恢复，反而不会导致高亲和力原始Ab1抗体丢失。本发明通过这两种不同方式(注：关注通用引物和简并引物使用的方法)制备噬菌体“Ab1抗体库”(注：需要和具体试验操作者协商，选择最适合本发明的方法和技术)。第二途径根据用途不同：其一，将体外培养的B细胞(生产抗体为目的)，通过转化为抗体分泌浆细胞，获得分泌性Ab1抗体(该途径虽获得的每一单个 克隆抗体的数量较少，但足够试验所用)，制备原始特异性“Ab1抗体库”。其二，将体外培养的B细胞(增值为目的)，作为抗原储存(注：每个B细胞膜表面有1万‑10万个BCR抗原分子，而且BCR排列方向一致都易接近，区别抗体作为免疫原)以备免疫不同品系兔子和鼠制备Ab2β抗体和获取Ab2β抗体产生细胞。通过这两条途径尽可能获得抗人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位的全部“Ab1抗体”，并以此制备和构建初级具有不同特殊功能和用途的“Ab1抗体库”：(2).构建具有不同特殊功能和用途的“Ab2β抗体库”①.专一筛选能够结合Ab1抗体抗原结合位点的B细胞：第一步试验：首先应用常规免疫学实验技术，分别提取纯化大量不同人和不同品系(注：包括杂交和野生)兔子以及鼠的B细胞(包括未经过免疫和经过免疫的不同器官组织来源及不同途径来源的B细胞)。其中含有第二阶段(1)……②……其二，将体外培养的B细胞(增值为目的)，作为抗原(注：每个B细胞膜表面有1万‑10万个BCR抗原分子，而且BCR排列方向一致都易接近，区别抗体作为免疫原)免疫不同品系兔子和鼠，并提取纯化经过免疫的B细胞(注：其免疫血清内含相应Ab2β抗体，可通过第一阶段制备的特异性Ab1抗体筛选出来，制备原始Ab2β抗体)。另外本试验重复指出：通过说明书2.1实验主要材料2.1.1途径……可获得内含专一针对和模拟人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位的特异性B细胞可达几十万至百万不同克隆，而且已注意到B细胞和抗原都会出现重复计算。其中必然会得到本发明所需的全部模拟各种已知和未知或变异的呼吸道上皮细胞表面病毒受体(如呼吸道以有包膜病毒为主，其受体表达十分丰富)的，具有较高亲和力的众多不同克隆的Ab2β抗体，这是本发明构建人源性“Ab2β抗体库”的最佳途径。第二步试验：通过本发明十分简单的独创性免疫试验技术，分别巧妙处理第一步试验获得的人和兔子以及鼠的B细胞与第一阶段获得的全部Ab1抗体，关键在于解决B细胞与Ab1抗体两者之间相互作用关系问题。即通过本发明独创性免疫试验技术，从这些B细胞中完全彻底清除掉与Ab1抗体本身的抗原结合部位不能结合的任何无关的B细胞，辩证思维就是指完全彻底清除掉那些专门与Ab1抗体(非抗原结合部位)本身 其它表位相结合的B细胞。经过本发明这种独创性特殊筛选技术和过程，唯一目的是全部回收(收集和保留)所有剩余的其它与本发明相关的B细胞(注：内含潜在的本发明所需的Ab2β抗体产生细胞)。第三步试验：.即将第二步试验……全部回收(收集和储存)所有剩余的与本发明相关的B细胞并和全部Ab1抗体分别分类进行相互作用，再通过流式细胞术(FCM)或结合免疫磁性微珠技术，可更多更快的筛选出专一结合Ab1抗体本身的抗原结合部位的特异性B细胞，即本发明所需的Ab2β抗体产生细胞。②制备和构建具有不同特殊功能和用途的“Ab2β抗体库”的方法和技术：首先将能够与Ab1抗体本身的抗原结合部位特异性结合的B细胞，进行体外培养并在不同刺激条件下，在特定的不同时间内，通过两条途径：第一条途径，将体外培养的B细胞(增值为目的)，通过构建噬菌体抗体库技术的两种不同方式：其一为主要方式，即通过B细胞内PCR(In‑CellPCR)装配技术‑‑噬菌体抗体库技术，以保证抗体的轻重链配对为体内原始配对的前提下，制备噬菌体“Ab2β抗体库”(注：本发明不排除伴随细胞内PCR(In‑CellPCR)技术‑‑噬菌体抗体库技术的不断进步，解决经多次免疫产生的千差万别不同克隆的记忆性B细胞，最重要“通用引物”设计的困难问题，制备轻重链配对为体内原始配对的噬菌体Ab2β抗体)。其二，即通常的构建噬菌体抗体库技术，，尽管这种方式获得的抗体基因是体外的随机组合。但由于抗体和抗原结合的特异性常主要由VH决定，所以本发明全部特异性B细胞(Ab2β抗体产生细胞)，可在不改变特异性的情况下，使其每一个特异性的VH与本发明特异性B细胞不同的VL进行组合(链替换)，产生特异性相同而亲和力不同的Ab2β抗体(注：不排除某些VH与VL因空间结构互补性差和稳定性差等原因导致配对失败)。因此本发明可在不改变每一个B细胞克隆特异性的情况下找到VH‑‑‑VL最佳配对，反而更可能筛选到高亲和力的Ab2β抗体抗体。或许由于类似免疫抗体库的原因，但本发明比免疫抗体库更具优越性和保障性，即全部由特异性B细胞克隆组成，如果数量足够大而且VH‑‑‑VL互补性强空间结构十分稳定，这会使原始抗体轻链和重链配对极易被恢复，反而不会导致高亲和力原始Ab2β抗体丢失。本发明通过这两种不同方式(注：关注通用引物和简并引物使用的方法)制备噬菌体“Ab2β抗体 库”(注：需要和具体试验操作者协商，选择最适合本发明的方法和技术)。第二条途径，将体外培养的B细胞(生产抗体为目的)，通过转化为抗体分泌浆细胞，获得分泌性Ab2β抗体(该途径虽获得的每一单个克隆抗体的数量较少，但足够试验所用)，制备原始特异性“Ab2β抗体库”。通过这两条途径尽可能获得模拟人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位的全“Ab2β抗体”，并以此制备和构建初级具有不同特殊功能和用途的“Ab2β抗体库”。(3)结合试验和竞争抑制试验应用各种常规免疫学实验技术：(1)根据结合试验，观察来自第二阶段不同途径的噬菌体Ab2β抗体和分泌性Ab2β抗体与第一阶段获得的原始Ab1抗体特异性结合的效果。(2)根据竞争抑制试验，观察来自第二阶段不同途径的噬菌体Ab2β抗体和分泌性Ab2β抗体竞争抑制人呼吸道上皮细胞与第一阶段获得的原始Ab1抗体结合的能力，特别是能否全方位阻断人呼吸道上皮细胞与原始Ab1抗体的结合能力(同时设置人呼吸道上皮细胞与原始Ab1抗体结合的对照组)，以此判断本发明第二阶段获得的全方位模拟人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位的“Ab2β抗体库”是否还存在“克隆漏洞”，本发明可通过特异性试验弥补这种“克隆漏洞”，从而完善“Ab2β抗体库”。(4).验证初级“Ab2β抗体库”的功能和效果：应用常规免疫学实验技术，利用引起普通感冒的各种病毒和不同流感减毒活疫苗及灭活疫苗等从初级“Ab2β抗体库”中筛选特异性抗体，并提取和纯化这种专一抗特定呼吸道病毒‑‑‑靶细胞结合位点的抗体，即模拟人呼吸道上皮细胞膜表面“病毒受体”的Ab2β抗体，以此验证初级“Ab2β抗体库”的功能和效果。确证试验成功的最重要标志是：“Ab2β抗体库”与引起普通感冒的各种病毒和不同流感特定疫苗特异性结合的范围越广说明成功率越高(设置巧妙的试验对照组)，同时说明本发明“Ab2β抗体库”构建越完善。如果与上述病毒和疫苗特异性结合的成功率达到百分之百，则意味着本发明“Ab2β抗体库”与未知和变异的致命性呼吸道病毒特异性结合的成功率也会极高。当然本发明“Ab2β抗体库”也会越来越完善。(5).致命性呼吸道病毒中和试验：应用常规免疫学实验技术，利用某些已知致命性呼吸道病毒或减毒活疫苗等，从初级“Ab2β抗体库”中筛选特异性抗体，并进行致命性病毒中和试验(委托试验)，确证特异性Ab2β抗体的功能和效果，制备针对某些特定致命性呼吸道病毒的特异性中和抗体，为工程抗体产业化和商品化产品‑‑‑‑‑特异性免疫球蛋白打基础。(6).制备和构建多个具有不同特殊功能和用途的“Ab1抗体库”和“Ab2β”抗体库”根据人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原(如呼吸道以有包膜病毒为主，其受体表达十分丰富)的分布特点以及与Ab1抗体和Ab2β抗体相互作用的特点，通过本发明十分简单的独创性免疫试验技术，可随着第一阶段和第二阶段试验，构建多个具有不同功能和用途的“Ab1抗体库”和多个相对应的“Ab2β抗体库”，用于筛选特异性抗病毒抗体和进行相应病毒中和试验。这些抗体库其中抗体克隆库容量估计最大的为104‑‑105。.对比一般抗体库107‑1010以上库容量，两者在库容总抗体数量相等情况下，本发明抗体库每一个单克隆抗体的数量都在对方每一个单克隆抗体数量的千倍‑‑‑百万倍以上，因此本发明“Ab2β”抗体库”与呼吸道病毒相互作用，根本就没有淘筛失败的可能性(注：抗体库库容量太大或每个特异性克隆数量太少都会影响筛选效果，因此要有度)。另外仅从抗原的免疫原性讲，动物源基因工程抗体如ScFv小分子抗体(包括双链和三链ScFv抗体)，其免疫原性与经过多次体细胞高频突变和具有种间独特型的人源抗体又有多大区别，本发明认为两者应用临床没有多大区别。(7)第二阶段试验需要时间12个月‑18个月(8)第二阶段预期产品：制备和构建多个具有不同特殊功能和用途的“Ab1抗体库”和“Ab2β”抗体库”(9)第二阶段试验结束后，立即向世界各大国申请发明专利，在全世界控制实验方法和主要技术及市场……逆向工程设计的两种附加实验方案事物的两面性理论‑‑‑Ab1抗体和Ab2抗体分别属于事物的两个面，这一原理对本附加实验方案启迪：即人呼吸道上皮细胞和呼吸道病毒同样分别属于事物的两个面，因此可以通过逆向工程设计两者程序位置互换的实验方案。(1)把本实验方案中的人呼吸道上皮细胞置换成特定呼吸道病毒或流感减毒活疫苗及灭活疫苗等，通过相同的本实验方案全部试验过程，制备抗和模拟病毒配体结合位点的Ab1抗体和Ab2β抗体，如果模拟病毒配体的Ab2β抗体能够特异性结合人呼吸道上皮细胞，说明抗病毒配体结合位点的Ab1抗体，就是本发明所指专一阻断特定呼吸道病毒‑‑‑‑‑‑人呼吸道上皮细胞结合部位的特异性中和抗体。(2)把本实验方案中的人呼吸道上皮细胞置换成特定呼吸道病毒或流感减毒活疫苗及灭活疫苗等，通过相同的本实验方案全部试验过程制备抗特定病毒Ab1抗体。同时制备抗人呼吸道上皮细胞膜表面不同抗原不同表位的Ab1抗体。将两种不同来源的Ab1抗体固定一方，筛选另一方(如利用所谓抗原柱纯化抗体技术)。其中发生特异性结合的抗体分别为模拟病毒受体的抗体和模拟病毒配体的抗体，而模拟病毒受体的抗体就是本发明所指专一阻断特定呼吸道病毒‑‑‑‑‑‑人呼吸道上皮细胞结合部位的特异性中和抗体。(3)该逆向工程设计的附加实验方案，不在本次发明的试验范围之内。最后本发明目标‑‑‑‑‑‑.市场商品化产品，即走向工程抗体产业化道路(可根据长远和短期目标精心制定规划，选择最合适工艺，)。工程抗体主要包括细胞工程抗体和基因工程抗体。细胞工程抗体，指该技术是在细胞水平上进行操作，如人B细胞的EBV转化及融合技术、杂交瘤细胞通过克隆化筛选产生单克隆抗体和转基因动物作为生物反应器通过乳汁获得特异性抗体等各种相关技术和方法。基因工程抗体则指在基因水平上进行操作，把特定编码抗体分子的目的基因，转移至大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞的表达系统，生产目的抗体等各种相关技术和方法。制备三种市场商品化产品‑‑‑‑(1)抗未知和变异的呼吸道病毒人体特异性免疫球蛋白或人源化特异性免疫球蛋白。(2)抗各种已知的呼吸道病毒人体特异性免疫球蛋白 或人源化特异性免疫球蛋白.。(3)仅抗1‑‑几个已知的特定致命性呼吸道病毒的人体特异性免疫球蛋白或人源化特异性免疫球蛋白。