[发明专利]一种脱氧河鲀毒素的提取方法

摘要

一种脱氧河鲀毒素的提取方法，先将粗品河鲀毒素用醋酸溶解，并加入无水乙醇搅拌均匀，离心除去其中的不溶物，得到河鲀毒素上清液，将上清液在装有乙醚的密闭容器中加温，析出河鲀毒素结晶，并得到母液；将上述母液浓缩后，加入氨水调节pH值，析出沉淀物，将此沉淀物通过处理后，即可获得含脱氧河鲀毒素沉淀物；将此沉淀物加入醋酸或磷酸溶解，使用高效制备液相色谱仪对其进行液相色谱分离，使用示差折光检测器或紫外检测器进行检测，按出峰图谱可收集到脱氧河鲀毒素的馏分；将上述馏分，加入层析柱中，用醋酸溶液进行洗脱，收集馏分；然后使用氨水调节此馏分的pH值即可析出白色固体将白色固体，经过处理后，即可得到脱氧河鲀毒素结晶。

主权项

一种脱氧河鲀毒素的提取方法，其特征包括以下步骤：一、制备河鲀毒素母液先将粗品河鲀毒素置于玻璃烧杯中，加浓度为7％‑15％的醋酸溶解，得到“A”溶液，在“A”溶液中加入剂量为“A”溶液量1‑10倍的无水乙醇，搅拌均匀，溶解后得到“B”溶液，将“B”溶液通过离心机分离，除去其中的不溶物，得到河鲀毒素上清液；将河鲀毒素上清液倒入烧杯后，移到密闭容器中，然后在密闭容器内放置一杯乙醚溶液，将密闭容器内的温度控制在10℃‑35℃；当乙醚向河鲀毒素‑醋酸‑乙醇‑水溶液扩散后，经过10‑60小时的反应，即可析出河鲀毒素结晶，得到母液“C”；二、高效液相色谱分离将母液“C”真空加热浓缩后，加入氨水将母液“C”pH值调节至7.5‑10后，析出沉淀物，将此沉淀物通过水洗、真空冷冻干燥处理后，即可获得白色的含脱氧河鲀毒素沉淀物；将此白色的含脱氧河鲀毒素沉淀物加入浓度为20％‑30％的醋酸或磷酸溶解，得到“D”溶液；使用高效制备液相色谱仪对“D”溶液进行液相色谱分离，色谱条件：C18反相柱；流动相为含有1mmol/L‑15mmol/L离子对试剂的0.05mol/L‑0.5mol/L缓冲液和0.5％‑5％甲醇，其流动相的流速为6mL/min‑15mL/min；使用示差折光检测器或紫外检测器进行检测；在高效液相色谱分离过程中，按出峰图谱可收集到脱氧河鲀毒素的馏分；三、层析脱盐处理将上述脱氧河鲀毒素馏分，缓慢加入装有生物凝胶或酸性阳离子树脂的层析柱中，再用浓度为3％‑20％的醋酸溶液进行洗脱，收集pH值为4‑7的馏分；然后使用氨水将此馏分的pH值调节至7.5‑10，即可析出白色固体；将白色固体经过水洗和真空冷冻干燥处理后，即可得到纯度较高的脱氧河鲀毒素结晶。