[发明专利]一种直接从土壤或其他基质中快速检测鉴定香蕉穿孔线虫的方法

摘要

本发明公开了一种直接从土壤或其他基质中快速检测鉴定香蕉穿孔线虫的方法，是先提取待检测样品中的DNA，经过Promega公司的WizardDNAClean-upSystems试剂盒纯化后作为模板，以SEQ ID NO:1～2所示序列为引物进行PCR扩增，如果能够扩增出518bp的目的条带，则证明待检测样品中含有香蕉穿孔线虫。该方法适用于香蕉栽培土壤或其他基质的检测，检测结果准确，灵敏度高，适用范围广，应用前景广阔。

主权项

一种直接从土壤或其他基质中快速检测鉴定香蕉穿孔线虫的方法，其特征在于步骤如下：（1）待检样品中DNA提取：称取待检样品，与等重的直径0.5mm玻璃珠一起移至尖底离心管中，加入体积比为1:1的磷酸缓冲液和SDS缓冲液，翻转3~4次；再加入体积比为24:1的氯仿和异戊醇，振荡后以3 000 rpm的速度离心，上清转移至一1.5 mL离心管；加入预冷的醋酸钠，混匀，‑20℃静置5min，常温离心，上清转移至另一新1.5 mL离心管；加入冷异丙醇，静置20min，离心，沉淀加入体积百分含量为70%的乙醇洗涤，离心，弃上清，重复洗涤一次，离心；沉淀自然风干，加入超纯水静置10min，获得DNA粗提液；（2）使用Promega公司的Wizard DNA Clean‑up Systems试剂盒纯化步骤（1）的DNA粗提液；（3）PCR检测：以纯化的DNA为模板，SEQ ID NO:1~2所示核苷酸序列为引物，进行PCR扩增，如果扩增出518bp的核苷酸序列，则证明待检样品中有香蕉穿孔线虫。